| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-23页 |
| 1 苏云金芽胞杆菌研究进展 | 第11-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简述 | 第11-12页 |
| ·Bt生物杀虫活性成分 | 第12页 |
| ·Bt伴胞晶体蛋白及其作用机理 | 第12-16页 |
| 2 昆虫中肠受体的概述 | 第16-21页 |
| ·氨肽酶N家族 | 第17-19页 |
| ·碱性磷酸酯酶 | 第19-20页 |
| ·类钙粘蛋白(Cadherin-like)家族 | 第20页 |
| ·其它受体 | 第20-21页 |
| 3. 昆虫受体与抗性 | 第21页 |
| 4. 本文的立题依据和意义 | 第21-23页 |
| 材料与方法 | 第23-35页 |
| 1 材料 | 第23-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·培养基和抗生素 | 第24页 |
| ·供试昆虫 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-35页 |
| ·菌体培养和Cry1Ac毒素的制备 | 第27-28页 |
| ·棉铃虫喂养与中肠组织提取 | 第28页 |
| ·棉铃虫中肠RNA提取和反转录PCR | 第28-29页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第29页 |
| ·APNs基因的克隆和表达 | 第29-31页 |
| ·棉铃虫中肠BBMV提取 | 第31页 |
| ·棉铃虫中肠总APN酶活测定 | 第31-32页 |
| ·Western blot检测 | 第32页 |
| ·胶内酶解和质谱鉴定 | 第32-33页 |
| ·免疫组化 | 第33-35页 |
| 结果与分析 | 第35-52页 |
| 1. Bt菌体培养和伴胞晶体蛋白的提取及蛋白含量测定 | 第35页 |
| 2. Cry1Ac毒素的活化与纯化 | 第35页 |
| 3. Cry1Ac毒素喂食及棉铃虫中肠解剖 | 第35-36页 |
| 4. 棉铃虫中肠总RNA提取和反转录PCR | 第36-37页 |
| 5. 实时荧光定量PCR检测 | 第37-40页 |
| 6. 氨肽酶N基因的克隆与表达 | 第40-44页 |
| ·氨肽酶N基因的克隆 | 第40页 |
| ·pET28a-APNx质粒热转化GB2005 | 第40-41页 |
| ·pET28a-APNx质粒热转化BL21 | 第41页 |
| ·蛋白诱导表达及纯化检测 | 第41-43页 |
| ·多克隆抗体检测 | 第43-44页 |
| 7. 棉铃虫BBMV蛋白的检测 | 第44-45页 |
| 8. Western blot检测CrylAc毒素对APNs表达的影响 | 第45-46页 |
| 9. Cry1Ac毒素对APNs总酶活的影响 | 第46-47页 |
| 10. DAB免疫组化 | 第47页 |
| 11. 激光共聚焦荧光免疫 | 第47-52页 |
| 讨论 | 第52-56页 |
| 1. Bt毒素受体研究方法 | 第52-53页 |
| 2. Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠APNs和ALP的影响 | 第53页 |
| 3. APN与昆虫抗性产生的关系 | 第53-56页 |
| 结语 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第65-66页 |
| 课题受资助的项目 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
