摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
第1章 绪论 | 第12-23页 |
1. Palladin 的发现 | 第13页 |
2. Palladin 的结构与亚型 | 第13-16页 |
·Palladin的结构 | 第13页 |
·Palladin的亚型 | 第13-16页 |
3. Palladin 的定位与分布特性 | 第16-17页 |
4. Palladin 的分子支架特征及其对细胞形态的影响 | 第17-19页 |
5. Palladin 的功能与研究意义 | 第19-22页 |
·Palladin对actin细胞骨架构建的影响 | 第20页 |
·Palladin在胚胎发育中的作用 | 第20页 |
·Palladin在创伤愈合中的作用 | 第20-21页 |
·Palladin与胰腺癌的相关性 | 第21-22页 |
6. 本论文的研究目的与意义 | 第22-23页 |
第2章 Palladin相关表达载体的构建 | 第23-39页 |
·实验材料 | 第23-24页 |
·菌种和质粒 | 第23页 |
·各种酶及主要生化试剂 | 第23页 |
·主要仪器 | 第23-24页 |
·实验方法 | 第24-32页 |
·质粒提取 | 第24-26页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
·DNA 的定量 | 第26页 |
·目的基因的获得 | 第26-28页 |
·限制性内切酶的酶切反应 | 第28页 |
·线性质粒 DNA 末端去磷酸化 | 第28-29页 |
·琼脂糖凝胶回收试剂盒 DNA 片段的回收 | 第29页 |
·外源 DNA 片段与质粒载体的连接反应 | 第29页 |
·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
·连接产物的转化 | 第30页 |
·阳性菌株筛选及鉴定(PCR 和酶切) | 第30-31页 |
·蛋白印记分析(Western blot) | 第31页 |
·转染 | 第31-32页 |
·实验结果 | 第32-38页 |
·pcDNA3.1(+)-Flag-HPF 表达载体的构建 | 第32-34页 |
·pGenesil-1-palladin-shRNA基因表达沉默载体的构建 | 第34-36页 |
·转染后靶细胞中palladin 的水平 | 第36-38页 |
本章小结 | 第38-39页 |
第3章 Palladin对细胞迁移和粘附的影响 | 第39-62页 |
·实验材料 | 第39-40页 |
·细胞系、菌株及载体质粒 | 第39页 |
·试剂及抗体 | 第39页 |
·主要实验设备 | 第39-40页 |
·实验方法 | 第40-45页 |
·细胞培养 | 第40-41页 |
·细胞计数 | 第41-42页 |
·用于哺乳动物转染的高纯度质粒 DNA 的制备 | 第42-43页 |
·转染(见第二章方法) | 第43页 |
·细胞裂解 | 第43页 |
·细胞创伤愈合实验(Cell Wound Healing Assay) | 第43页 |
·Transwell实验 | 第43-44页 |
·靶细胞在细胞外基质上的粘附实验 | 第44页 |
·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第44-45页 |
·蛋白印记分析(见第二章方法) | 第45页 |
·靶细胞在不同细胞外基质上的粘附性分析 | 第45页 |
·实验结果 | 第45-61页 |
·Palladin对细胞迁移能力的影响 | 第45-51页 |
·Palladin对靶细胞在胞外基质FN上粘附的影响 | 第51-53页 |
·细胞状态与palladin水平的关系 | 第53-56页 |
·靶细胞在不同条件下的粘附性分析 | 第56-61页 |
本章小结 | 第61-62页 |
全文结论 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-69页 |
硕士期间发表的论文及专利 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |