| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·NF-κB 信号通路 | 第10-17页 |
| ·NF-κB 家族及其调控 | 第10-13页 |
| ·NF-κB 在炎性肠病中的作用 | 第13-14页 |
| ·N F-κB 与结肠炎相关结肠癌 | 第14-16页 |
| ·NF- B 促进大肠癌发生的作用机制 | 第16-17页 |
| ·细胞角蛋白 8 研究进展 | 第17-19页 |
| ·细胞角蛋白 8 结构 | 第17页 |
| ·细胞角蛋白 8 功能 | 第17-18页 |
| ·CK8 负调 NF- B 信号通路可能具有重要的生理学意义 | 第18-19页 |
| ·本课题研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 CK8~-/-小鼠自发结肠炎伴随 NF-κB 信号通路异常活化 | 第20-40页 |
| ·材料与方法 | 第20-24页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·常用试剂 | 第20页 |
| ·常用溶液配制 | 第20-21页 |
| ·小鼠基因型鉴定引物 | 第21页 |
| ·CK8~-/-小鼠鉴定 | 第21-22页 |
| ·HE 染色以及组织学观察 | 第22页 |
| ·胸腺、脾脏、淋巴结细胞悬液制备 | 第22-23页 |
| ·分离肝脏单个核细胞 | 第23页 |
| ·FACS 检测淋巴细胞 | 第23页 |
| ·诱导小鼠结肠癌模型 | 第23页 |
| ·提取组织 RNA 以 Realtime PCR 检测 | 第23-24页 |
| ·统计学分析 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-38页 |
| ·小鼠基因型鉴定 | 第24-25页 |
| ·小鼠不同组织器官 CK8 表达鉴定 | 第25-27页 |
| ·CK8 敲除小鼠发生严重的结肠炎及肝脏炎细胞浸润 | 第27-31页 |
| ·CK8 敲除小鼠胸腺 T 细胞活化异常 | 第31-33页 |
| ·CK8 对结肠癌诱导剂 AOM/ DSS 更加敏感 | 第33-35页 |
| ·CK8 敲除小鼠中 NF- B 信号通路异常活化 | 第35-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 CK8 负调控 NF-κB 信号通路的分子机制 | 第40-59页 |
| ·材料与方法 | 第40-48页 |
| ·质粒 | 第40页 |
| ·细胞 | 第40页 |
| ·常用试剂和试剂盒 | 第40-41页 |
| ·主要溶剂配制 | 第41-42页 |
| ·一般细胞培养条件 | 第42页 |
| ·提取质粒 | 第42-43页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第43页 |
| ·Western Blot | 第43页 |
| ·Co-IP | 第43-44页 |
| ·荧光素酶检测 | 第44页 |
| ·碱性磷酸酶报告基因检测 | 第44-45页 |
| ·细胞总 RNA 提取 | 第45-46页 |
| ·Realtime PCR | 第46-47页 |
| ·磷酸化实验 | 第47页 |
| ·EMSA（凝胶超阻滞）实验 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-56页 |
| ·CK8 抑制 TNF 诱导的 NF-κB 的活化 | 第48-49页 |
| ·CK8 抑制 IκB 的磷酸化 | 第49-50页 |
| ·CK8 抑制 NF-κB DNA 结合能力 | 第50-51页 |
| ·过表达 CK8 抑制 NF-κB 下游靶基因表达 | 第51页 |
| ·CK8 抑制 CLB502 诱导的 NF-κB 信号通路活化 | 第51-52页 |
| ·CK8 抑制 NF-κB 信号通路发生在 IKK 复合体水平 | 第52-53页 |
| ·CK8 抑制 NEMO 与 TRAF2 之间的相互作用 | 第53-54页 |
| ·CK8 不影响 NEMO 与 A20 之间的相互作用 | 第54-55页 |
| ·CK8 不影响 NEMO 与 CYLD 之间的相互作用 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 CK8 慢病毒载体的构建 | 第59-68页 |
| ·材料与方法 | 第59-62页 |
| ·质粒 | 第59页 |
| ·细胞 | 第59页 |
| ·常用试剂及试剂盒 | 第59页 |
| ·主要溶液配制 | 第59页 |
| ·CK8 RNAi 慢病毒载体的构建 | 第59-61页 |
| ·CK8 过表达慢病毒载体构建 | 第61页 |
| ·慢病毒包装 | 第61页 |
| ·流式细胞术测病毒滴度 | 第61-62页 |
| ·慢病毒感染效果检测 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-67页 |
| ·CK8 慢病毒干涉载体的构建和包装 | 第62-64页 |
| ·CK8 过表达慢病毒载体的构建及病毒包装 | 第64-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 结论与展望 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
