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番茄抗晚疫病基因Ph-3的克隆及其效应子的筛选

摘要第1-8页
Abstract第8-16页
第一章 引言第16-26页
   ·晚疫病菌的起源及变化第16-17页
   ·番茄晚疫病菌群体的变化第17-18页
   ·番茄晚疫病表型鉴定方法第18-20页
     ·田间鉴定第19页
     ·温室鉴定第19页
     ·离体接种鉴定第19-20页
   ·晚疫病菌与寄主的互作第20-22页
     ·晚疫病菌的致病力机制第20-21页
     ·植物免疫系统第21-22页
   ·番茄晚疫病抗性育种和分子生物学研究进展第22-24页
   ·番茄晚疫病研究中存在的问题及展望第24-25页
   ·本文的研究内容及意义第25-26页
第二章 番茄抗晚疫病基因 Ph-3 的精细定位第26-39页
   ·试验材料与方法第26-31页
     ·VIGS 试验所用番茄材料第26页
     ·VIGS 引物设计第26页
     ·番茄叶片 RNA 提取第26-27页
     ·RT-PCR第27-28页
     ·载体构建第28页
     ·电击法农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备第28-29页
     ·电击法转化农杆菌 GV3101第29页
     ·农杆菌注射第29-30页
     ·重组单株筛选所用番茄材料第30页
     ·标记开发第30页
     ·抗病性接种鉴定第30-31页
   ·结果与分析第31-38页
     ·Ph-3 基因瞬时沉默载体的构建第31-32页
     ·RGA 的功能分析第32页
     ·进一步缩小 Ph-3 基因区间第32-37页
     ·Ph-3 位点番茄和马铃薯的共线性比较第37-38页
   ·讨论第38-39页
第三章 番茄抗晚疫病 R 基因 Ph-3 的克隆第39-54页
   ·试验材料与方法第39-44页
     ·S. pimpinellifolium L3708 BAC 文库筛选第39页
     ·BAC 质粒大片段 DNA 提取第39-40页
     ·Ph-3 候选基因的扩增第40-41页
     ·转基因表达载体的构建第41-42页
     ·番茄转基因流程第42-43页
     ·转基因植株的表型鉴定第43页
     ·荧光定量 PCR 检测 Ph-3 转基因植株的表达第43-44页
   ·结果与分析第44-51页
     ·S. pimpinellifolium L3708 BAC 文库筛选第44页
     ·BAC 序列分析第44-46页
     ·Ph-3 候选基因预测第46-48页
     ·Ph-3 候选基因功能互补试验第48-49页
     ·Ph-3 基因的结构第49-51页
   ·讨论第51-54页
     ·Ph-3 基因位于 9 号染色体上一个 Rpi 基因热点区域第51-52页
     ·Ph-3 基因簇的进化第52-53页
     ·综合利用番茄和马铃薯抗晚疫病基因以获得持久抗性第53-54页
第四章 番茄抗晚疫病基因 Ph-3 对应效应子的筛选第54-59页
   ·试验材料与方法第54-55页
     ·试验材料第54页
     ·农杆菌注射第54-55页
     ·PVX 侵染第55页
   ·结果与分析第55-57页
     ·Ph-3 不识别马铃薯抗晚疫病基因 Rpi-vnt1、Rpi-mcq1 和 R9a 的效应子第55-56页
     ·利用农杆菌注射法筛选 Ph-3 基因对应的效应子第56页
     ·利用 PVX 侵染法验证 Ph-3 基因与效应子 PITG_09218 的识别第56-57页
   ·讨论第57-59页
第五章 晚疫病菌的寄主特异性第59-68页
   ·试验材料与方法第59-61页
     ·试验材料第59-60页
     ·离体叶片接种鉴定第60页
     ·马铃薯转基因流程第60-61页
     ·荧光定量 PCR 检测 Ph-3 基因在转基因马铃薯中的表达第61页
   ·结果与分析第61-66页
     ·CLN2037B 和 Moneymaker 接种不同马铃薯晚疫病菌生理小种后的反应第61-62页
     ·CLN2037B 和 Moneymaker 接种番茄晚疫病菌生理小种 CA-65 后的反应第62页
     ·CLN2037B 和 Moneymaker 接种不同马铃薯和番茄晚疫病菌后的异同第62-65页
     ·转 Ph-3 基因马铃薯品种 Diseree 的抗性第65-66页
   ·讨论第66-68页
第六章 全文结论第68-69页
参考文献第69-80页
附录第80-83页
致谢第83-85页
作者简历第85页

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