| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 英文縮略词表 | 第9-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-36页 |
| ·多能性干细胞研究进展 | 第11-22页 |
| ·多能性干细胞概述 | 第11-13页 |
| ·胚胎干细胞机制研究 | 第13-18页 |
| ·干细胞的临床应用研究 | 第18-22页 |
| ·诱导多能性干细胞研究进展 | 第22-29页 |
| ·重编程方法概述 | 第22-23页 |
| ·诱导多能性干细胞的研究历程 | 第23页 |
| ·诱导多能性干细胞机制研究 | 第23-24页 |
| ·诱导多能性干细胞技术研究 | 第24-28页 |
| ·大动物诱导多能性干细胞的研究 | 第28-29页 |
| ·诱导多能性干细胞的应用前景 | 第29页 |
| ·调控系统在诱导多能性干细胞研究中的应用 | 第29-36页 |
| ·RNA水平调控系统 | 第29-31页 |
| ·蛋白水平调控系统 | 第31-33页 |
| ·调控系统在诱导多能性干细胞研究中的应用 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第34-36页 |
| 第二章 材料和方法 | 第36-57页 |
| ·实验材料 | 第36-40页 |
| ·菌株和细胞系 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36-39页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第39页 |
| ·分析软件和网址 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-57页 |
| ·感受态细胞的制备、效价的测定及DNA的转化 | 第40-41页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第41-42页 |
| ·胚胎成纤维细胞的培养 | 第42页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·利用piggyBac载体诱导小鼠多能性干细胞(图2-1) | 第43-45页 |
| ·小鼠多能性干细胞的培养 | 第45页 |
| ·小鼠多能性干细胞的鉴定 | 第45-46页 |
| ·定量PCR检测 | 第46-48页 |
| ·Western Blot检测 | 第48-50页 |
| ·转基因小鼠的制备 | 第50-55页 |
| ·胚胎成纤维细胞系的建立 | 第55页 |
| ·胚胎成纤维细胞系转基因阳性检测 | 第55-56页 |
| ·胚胎成纤维细胞系直接TMP调控诱导获得小鼠iPS细胞 | 第56-57页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第57-93页 |
| ·利用TMP调控系统获得小鼠iPS细胞 | 第57-64页 |
| ·载体构建 | 第57-59页 |
| ·利用TMP调控载体O~(dd)KS诱导小鼠多能性干细胞 | 第59-60页 |
| ·小鼠诱导多能性干细胞的鉴定 | 第60-61页 |
| ·TMP调控系统效率统计 | 第61-62页 |
| ·不同因子调控系统诱导获得小鼠iPS细胞效率比较 | 第62-64页 |
| ·利用TMP调控系统研究细胞重编程过程 | 第64-81页 |
| ·TMP调控系统的浓度依赖性 | 第65-66页 |
| ·TMP调控系统的灵敏性 | 第66-67页 |
| ·多能性因子OCT4在重编程过程中的的剂量依赖性调控 | 第67-70页 |
| ·多能性因子在重编程过程中的时间依赖性调控 | 第70-73页 |
| ·去甲基化相关因子在重编程过程中的调控研究 | 第73-74页 |
| ·重编程过程中内外源OCT4表达的的动态学变化 | 第74-78页 |
| ·TMP调控系统在其他物种细胞重编程过程中的应用 | 第78-81页 |
| ·TMP调控系统转基因小鼠的制备及研究 | 第81-93页 |
| ·原核显微注射法制备转基因小鼠 | 第81-82页 |
| ·转基因小鼠PCR鉴定 | 第82-83页 |
| ·转基因小鼠传代 | 第83-84页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞建系 | 第84-85页 |
| ·胚胎成纤维细胞系直接TMP调控诱导获得小鼠iPS细胞系 | 第85-87页 |
| ·昆明白小鼠胚胎成纤维细胞诱导获得小鼠iPSCs | 第87-88页 |
| ·129小鼠与昆明白小鼠杂交胚胎成纤维细胞建系 | 第88-89页 |
| ·129小鼠与昆明白小鼠杂交胚胎成纤维细胞系直接重编程诱导 | 第89-90页 |
| ·原代诱导基因表达检测 | 第90-93页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第93-96页 |
| ·对于调控系统应用的讨论 | 第93页 |
| ·对于转录后修饰的讨论 | 第93-94页 |
| ·对于外源OCT4剂量依赖性的讨论 | 第94页 |
| ·对于各因子时间依赖性的讨论 | 第94页 |
| ·对于去甲基化相关因子作用的讨论 | 第94-95页 |
| ·对于猪iPS细胞诱导的讨论 | 第95页 |
| ·对于TMP转基因系统获得同质性体细胞的讨论 | 第95-96页 |
| 第五章 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-108页 |
| 附录 论文中涉及的引物及探针 | 第108-111页 |
| 附表1 Q-PCR所用引物及探针 | 第108-109页 |
| 附表2 转基因小鼠检测引物 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 个人简介 | 第113页 |
