| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| ·丙酮酸的性质与用途 | 第14页 |
| ·丙酮酸的生产 | 第14-19页 |
| ·化学合成法生产丙酮酸 | 第14-16页 |
| ·生物法生产丙酮酸 | 第16-19页 |
| ·生物直接发酵法 | 第16-18页 |
| ·生物催化转化法 | 第18-19页 |
| ·代谢工程 | 第19-21页 |
| ·代谢工程的概念 | 第19页 |
| ·代谢工程的原理方法及应用 | 第19-21页 |
| ·LpdA突变菌 | 第21-26页 |
| ·LpdA基因 | 第21-22页 |
| ·基因敲除 | 第22-24页 |
| ·基因敲除过程中用到的辅助质粒 | 第24-26页 |
| ·本文的研究思路和目标 | 第26-27页 |
| 第二章 不同糖为碳源培养E.coli lpdA~-积累丙酮酸 | 第27-44页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第27-29页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29页 |
| ·培养基组成 | 第29页 |
| ·培养条件 | 第29页 |
| ·分析方法 | 第29-35页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第29-30页 |
| ·菌体浓度标准曲线 | 第29-30页 |
| ·发酵液中菌体浓度测定 | 第30页 |
| ·D-葡萄糖浓度的测定 | 第30-32页 |
| ·DNS法原理 | 第30-31页 |
| ·DNS法标准曲线 | 第31-32页 |
| ·发酵液中葡萄糖浓度的DNS法测定 | 第32页 |
| ·DNP法测定丙酮酸浓度 | 第32-34页 |
| ·DNP法原理 | 第32-33页 |
| ·DNP法标准曲线 | 第33-34页 |
| ·发酵液中丙酮酸浓度的DNP法测定 | 第34页 |
| ·HPLC法测定丙酮酸浓度 | 第34-35页 |
| ·HPLC色谱条件 | 第34页 |
| ·HPLC标准曲线 | 第34-35页 |
| ·HPLC法测定发酵液中丙酮酸的浓度 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-43页 |
| ·LpdA突变菌代谢网络 | 第35-37页 |
| ·野生型大肠杆菌的葡萄糖发酵结果 | 第37页 |
| ·LpdA突变菌分别以不同糖为碳源发酵积累丙酮酸 | 第37-40页 |
| ·接种浓度对葡萄糖为碳源发酵的影响 | 第40-41页 |
| ·LpdA突变菌在不同葡萄糖浓度下发酵 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 E.coli lpdA~-培养基优化及代谢分析 | 第44-59页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第44页 |
| ·菌种 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·仪器设备 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·培养基组成 | 第44-45页 |
| ·培养条件 | 第45页 |
| ·分析方法 | 第45-47页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第45-46页 |
| ·D-葡萄糖浓度的测定 | 第46页 |
| ·DNP法测定丙酮酸浓度 | 第46页 |
| ·HPLC法测定丙酮酸乙酸浓度 | 第46-47页 |
| ·HPLC色谱条件 | 第46页 |
| ·HPLC标准曲线 | 第46-47页 |
| ·HPLC法测定发酵液中丙酮酸、乙酸的浓度 | 第47页 |
| ·荧光分光光度法检测胞内NAD~+及NADH浓度 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-57页 |
| ·补充维生素对E.coli lpdA~-发酵的影响 | 第47-50页 |
| ·在基本培养基中添加LB培养基时lpdA突变菌发酵葡萄糖 | 第50-51页 |
| ·丙酮酸为底物的发酵考察 | 第51-55页 |
| ·野生型大肠杆菌与lpdA突变菌的丙酮酸发酵结果 | 第51-53页 |
| ·不同接种量对lpdA突变菌以丙酮酸为碳源发酵的影响 | 第53-55页 |
| ·丙酮酸积累与NADH/NAD~+的关联 | 第55-57页 |
| ·LpdA突变菌丙酮酸代谢 | 第55-56页 |
| ·丙酮酸积累与氧化还原电位的关联 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 大肠杆菌呼吸链基因敲除菌株的代谢分析 | 第59-78页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第59-61页 |
| ·菌种 | 第59-60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·仪器设备 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·培养基组成 | 第61-62页 |
| ·培养条件 | 第62页 |
| ·分析方法 | 第62-66页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第62页 |
| ·胞外代谢物检测 | 第62-63页 |
| ·CO_2和O_2检测 | 第63页 |
| ·酶活检测 | 第63-64页 |
| ·利用RT-PCR考察基因转录水平 | 第64-66页 |
| ·RNA的抽提 | 第64页 |
| ·RNA的定量 | 第64页 |
| ·RNA的纯度测定 | 第64页 |
| ·特定基因的扩增及电泳 | 第64-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-77页 |
| ·CyoA和cydB突变菌代谢 | 第66-67页 |
| ·分批培养 | 第67-74页 |
| ·合成培养基培养 | 第67-72页 |
| ·缺氮培养基培养 | 第72-74页 |
| ·恒化器培养 | 第74-77页 |
| ·合成培养基培养 | 第74页 |
| ·缺氮培养基培养 | 第74-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
