| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| ·抗菌肽概述 | 第10页 |
| ·抗菌肽的分类 | 第10-13页 |
| ·根据来源分类 | 第10-11页 |
| ·根据结构分类 | 第11-13页 |
| ·抗菌肽的生物学活性 | 第13-16页 |
| ·抗细菌活性 | 第13页 |
| ·抗真菌活性 | 第13页 |
| ·抗寄生虫活性 | 第13-14页 |
| ·抗病毒活性 | 第14页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第14-15页 |
| ·其它作用 | 第15-16页 |
| ·抗菌肽的杀菌机制 | 第16-19页 |
| ·胞外作用 | 第16-17页 |
| ·胞内作用 | 第17-19页 |
| ·目的抗菌肽简介 | 第19-20页 |
| ·研究意义及主要内容 | 第20-21页 |
| 第2章 抗菌肽 PG-1 基因的克隆和真核表达载体 pPICZa-A-PG-1 的构建 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·试验用菌株及载体 | 第21页 |
| ·主要试剂及其试剂盒 | 第21页 |
| ·试验仪器 | 第21-22页 |
| ·主要培养基及溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·试验方法 | 第24-30页 |
| ·重组质粒 pPICZαA -PG-1 的构建策略 | 第24页 |
| ·抗菌肽 PG-1 基因改造 | 第24-25页 |
| ·抗菌肽 PG-1 的 PCR 扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物的电泳检测 | 第25-26页 |
| ·目的基因片段进行割胶回收 | 第26页 |
| ·真核表达载体 pPICZαA 质粒的提取 | 第26-28页 |
| ·载体和目的基因的双酶切及连接 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备、转化及重组筛选 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·抗菌肽 PG-1 基因的 PCR 结果 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒 pPICZa-A-PG-1 测序鉴定 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 抗菌肽 PG-1 的真核表达及纯化 | 第34-46页 |
| ·试验材料 | 第34-36页 |
| ·菌种和引物 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| ·培养基及化学试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-41页 |
| ·P. pastoris X-33 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·重组质粒 pPICZαA-PG-1 线性化 | 第37页 |
| ·酵母的电击转化 | 第37页 |
| ·阳性菌落的筛选和酵母重组子的 PCR 鉴定 | 第37-39页 |
| ·酵母重组子的诱导表达及 Tricine-SDS-PAGE 电泳 | 第39-40页 |
| ·粗蛋白的浓度测定 | 第40页 |
| ·镍柱纯化 | 第40-41页 |
| ·结果和分析 | 第41-44页 |
| ·酵母重组子的 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·酵母重组子的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·发酵产物粗蛋白的浓度测定 | 第43页 |
| ·镍柱纯化及 Tricine-SDS-PAGE 电泳 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第4章 PG-1 生物学活性的初步研究 | 第46-53页 |
| ·试验材料 | 第46页 |
| ·试验用菌株及肿瘤细胞 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要溶液的配制 | 第46页 |
| ·主要实验仪器 | 第46页 |
| ·试验方法 | 第46-48页 |
| ·抗菌肽抗菌活性的检测 | 第46-47页 |
| ·癌细胞的培养和计数 | 第47页 |
| ·体外抗肿瘤活性检测 | 第47页 |
| ·绘制细胞毒实验曲线 | 第47-48页 |
| ·结果和分析 | 第48-50页 |
| ·PG-1 的抑菌活性测定 | 第48页 |
| ·MIC 的测定 | 第48页 |
| ·PG-1 对肿瘤细胞的抑制作用 | 第48-50页 |
| ·细胞毒试验曲线 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第5章 结论 | 第53-54页 |
| ·抗菌肽 PG-1 基因的克隆与表达纯化 | 第53页 |
| ·抗菌肽 PG-1 的生物活性 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 缩略语词汇表 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第63页 |
