| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-47页 |
| 1 课题提出 | 第18页 |
| 2 前人研究进展 | 第18-46页 |
| ·抗坏血酸的化学属性 | 第19-20页 |
| ·抗坏血酸与人类和动物的关系 | 第20-25页 |
| ·抗坏血酸在人类和动物中的主要功能 | 第20-21页 |
| ·抗坏血酸在人类和动物中的生物合成 | 第21-22页 |
| ·人类对抗坏血酸的获取与利用 | 第22-25页 |
| ·抗坏血酸在植物中的主要功能 | 第25-29页 |
| ·抗氧化作用与抗逆境胁迫 | 第25-27页 |
| ·作为酶的辅因子 | 第27-28页 |
| ·调节植物生长发育 | 第28-29页 |
| ·抗坏血酸在植物中的合成路径 | 第29-32页 |
| ·L-半乳糖途径 | 第30-31页 |
| ·D-半乳糖醛酸途径 | 第31页 |
| ·古洛糖途径 | 第31-32页 |
| ·肌醇途径 | 第32页 |
| ·抗坏血酸在植物中的氧化还原和分解 | 第32-34页 |
| ·抗坏血酸的氧化还原 | 第32-33页 |
| ·抗坏血酸的分解路径 | 第33-34页 |
| ·抗坏血酸在植物中的分布和运输 | 第34-36页 |
| ·抗坏血酸的分布 | 第34-35页 |
| ·抗坏血酸的运输 | 第35-36页 |
| ·植物抗坏血酸积累的调控 | 第36-40页 |
| ·植物抗坏血酸积累的直接构成因素 | 第36-38页 |
| ·植物抗坏血酸积累的遗传调控 | 第38-39页 |
| ·植物抗坏血酸积累的环境调控 | 第39-40页 |
| ·提高植物抗坏血酸含量的研究与应用 | 第40-45页 |
| ·园艺植物抗坏血酸研究进展及存在问题 | 第45-46页 |
| 3 本研究的目的与内容 | 第46-47页 |
| 材料与方法 | 第47-74页 |
| 1 实验材料 | 第47-49页 |
| ·植物实验材料 | 第47-48页 |
| ·载体与菌株 | 第48页 |
| ·主要实验试剂 | 第48页 |
| ·主要实验仪器 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-74页 |
| ·抗坏血酸含量的测定 | 第49-50页 |
| ·样品制备 | 第49页 |
| ·HPLC测定 | 第49页 |
| ·数据分析 | 第49-50页 |
| ·总抗坏血酸含量的测定 | 第50-51页 |
| ·样品制备 | 第50页 |
| ·HPLC测定 | 第50页 |
| ·数据分析 | 第50-51页 |
| ·脱氢抗坏血酸含量和氧化还原水平分析 | 第51页 |
| ·脱氢抗坏血酸含量的计算 | 第51页 |
| ·抗坏血酸氧化还原水平的计算 | 第51页 |
| ·抗坏血酸分布的细胞学观察 | 第51-52页 |
| ·样品处理 | 第51页 |
| ·石蜡制片与显微观察 | 第51-52页 |
| ·半薄制片与显微观察 | 第52页 |
| ·超薄制片与透射电镜观察 | 第52页 |
| ·脱氢抗坏血酸分布的细胞学观察 | 第52-53页 |
| ·样品处理 | 第52-53页 |
| ·冷冻制片与显微观察 | 第53页 |
| ·石蜡制片与显微观察 | 第53页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关代谢物含量的测定 | 第53-54页 |
| ·样品制备 | 第53-54页 |
| ·GC-MS测定 | 第54页 |
| ·数据分析 | 第54页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关基因的克隆 | 第54-58页 |
| ·简并引物设计 | 第54-55页 |
| ·总RNA提取与检测 | 第55-56页 |
| ·mRNA分离与cDNA合成 | 第56页 |
| ·PCR扩增与产物分离 | 第56-57页 |
| ·PCR产物克隆与检测 | 第57页 |
| ·基因序列分析 | 第57-58页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关基因的表达分析 | 第58-60页 |
| ·定量引物设计与检测 | 第58-59页 |
| ·总RNA提取与mRNA分离 | 第59页 |
| ·cDNA合成与检测 | 第59页 |
| ·实时定量PCR | 第59-60页 |
| ·数据分析 | 第60页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关酶活性测定 | 第60-63页 |
| ·样品制备 | 第60页 |
| ·半乳糖脱氢酶活性测定 | 第60-61页 |
| ·半乳糖醛酸内酯脱氢酶活性测定 | 第61页 |
| ·抗坏血酸氧化酶活性测定 | 第61页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶活性测定 | 第61-62页 |
| ·脱氢抗坏血酸还原酶活性测定 | 第62页 |
| ·单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定 | 第62页 |
| ·数据分析 | 第62-63页 |
| ·目的基因全长cDNA的克隆 | 第63-65页 |
| ·RACE引物设计 | 第63-64页 |
| ·总RNA提取与mRNA分离 | 第64页 |
| ·RACE | 第64页 |
| ·PCR扩增与产物克隆 | 第64-65页 |
| ·基因序列分析 | 第65页 |
| ·目的基因全长DNA和启动子的克隆 | 第65-69页 |
| ·引物设计 | 第65-66页 |
| ·DNA提取与纯化 | 第66-67页 |
| ·PCR扩增基因全长 | 第67页 |
| ·染色体步移扩增启动子 | 第67-68页 |
| ·目标产物分离与克隆 | 第68-69页 |
| ·基因序列分析 | 第69页 |
| ·农杆菌介导拟南芥的转化与鉴定 | 第69-73页 |
| ·表达载体构建与农杆菌转化 | 第69-70页 |
| ·拟南芥转化与筛选 | 第70-71页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第71-72页 |
| ·抗坏血酸含量测定 | 第72页 |
| ·数据分析 | 第72-73页 |
| ·农杆菌介导野草莓的转化与鉴定 | 第73-74页 |
| ·二倍体野草莓的转化与筛选 | 第73-74页 |
| 结果与分析 | 第74-133页 |
| 1 果实发育过程中抗坏血酸的含量变化分析 | 第74-78页 |
| ·果实生长发育状况 | 第74-75页 |
| ·抗坏血酸含量变化 | 第75-78页 |
| 2 果实发育过程中抗坏血酸的细胞学分布与变化 | 第78-82页 |
| ·抗坏血酸的细胞学定位与分布 | 第79-81页 |
| ·抗坏血酸的分布变化 | 第81-82页 |
| 3 果实发育过程中抗坏血酸合成代谢相关代谢物含量变化分析 | 第82-86页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关代谢物含量的变化 | 第84-86页 |
| 4 抗坏血酸合成代谢相关基因的克隆与分析 | 第86-91页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关基因的克隆 | 第87-88页 |
| ·抗坏血酸合成代谢相关基因的序列分析 | 第88-91页 |
| 5 果实发育过程中抗坏血酸合成代谢相关基因表达变化分析 | 第91-98页 |
| ·L-半乳糖途径相关基因表达变化分析 | 第91-95页 |
| ·其他合成途径相关基因表达变化分析 | 第95-96页 |
| ·循环途径相关基因表达变化分析 | 第96-98页 |
| 6 果实发育过程中抗坏血酸合成代谢相关酶活性变化分析 | 第98-103页 |
| ·L-半乳糖途径相关酶活性变化分析 | 第99-100页 |
| ·循环途径相关酶活性变化分析 | 第100-101页 |
| ·果实发育过程中抗坏血酸氧化还原水平变化分析 | 第101-103页 |
| 7 不同组织器官间(脱氢)抗坏血酸的含量和分布的变化 | 第103-110页 |
| ·不同组织器官中(脱氢)抗坏血酸的含量变化 | 第103-105页 |
| ·脱氢抗坏血酸的细胞学分布 | 第105-107页 |
| ·抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的分布差异与变化 | 第107-110页 |
| 8 抗坏血酸合成代谢关键基因cDNA全长克隆与分析 | 第110-122页 |
| ·GME基因全长cDNA克隆与序列分析 | 第111-113页 |
| ·DHAR基因全长cDNA克隆与序列分析 | 第113-119页 |
| ·其它基因全长cDNA克隆与序列分析 | 第119-122页 |
| 9 抗坏血酸合成代谢关键基因的功能验证 | 第122-128页 |
| ·RrGME和RrDHAR转化拟南芥与转基因株系分子鉴定 | 第122-125页 |
| ·在拟南芥中超量表达RrGME对抗坏血酸含量的影响 | 第125-126页 |
| ·在拟南芥中超量表达RrDHAR对抗坏血酸含量的影响 | 第126-128页 |
| 10 抗坏血酸合成代谢关键基因启动子的克隆与分析 | 第128-133页 |
| ·RrGME基因全长和启动子的克隆与分析 | 第128-130页 |
| ·RrDHAR基因全长和启动子的克隆与分析 | 第130-133页 |
| 讨论 | 第133-151页 |
| 1 果实和叶片抗坏血酸的积累变化 | 第133-135页 |
| ·刺梨果实抗坏血酸的含量变化与众不同 | 第133-134页 |
| ·刺梨果实细胞中抗坏血酸的积累速率极其高 | 第134-135页 |
| 2 抗坏血酸合成代谢相关基因的作用 | 第135-137页 |
| 3 抗坏血酸合成对果实抗坏血酸积累的影响 | 第137-141页 |
| ·L-半乳糖途径和D-半乳糖醛酸途径协同合成刺梨果实抗坏血酸 | 第137-139页 |
| ·RrGME是刺梨L-半乳糖途径合成抗坏血酸的关键基因 | 第139-141页 |
| 4 抗坏血酸氧化还原对果实抗坏血酸积累的影响 | 第141-145页 |
| ·循环再生途径是刺梨果实抗坏血酸积累的主要路径 | 第141-142页 |
| ·RrDHAR是刺梨果实抗坏血酸积累的关键基因 | 第142-145页 |
| 5 抗坏血酸转运参与了刺梨果实抗坏血酸的积累 | 第145-146页 |
| 6 刺梨果实高含量抗坏血酸积累的分子机理 | 第146-147页 |
| 7 刺梨果实积累高含量抗坏血酸的生物学意义猜想 | 第147-149页 |
| 8 未来研究设想 | 第149-151页 |
| 参考文献 | 第151-172页 |
| 附图 | 第172-173页 |
| 附录：博士研究生期间发表的论文 | 第173-174页 |
| 致谢 | 第174-175页 |
