| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 前言 | 第11页 |
| 1.2 GolS基因家族分类及基因结构 | 第11-12页 |
| 1.3 肌醇半乳糖苷合酶与棉子糖系列寡糖生物合成 | 第12-13页 |
| 1.4 肌醇半乳糖苷合酶的生物学功能 | 第13-17页 |
| 1.4.1 肌醇半乳糖苷合酶在植物非生物逆境响应中的作用 | 第14-15页 |
| 1.4.2 肌醇半乳糖苷合酶在植物生物逆境响应中的作用 | 第15-16页 |
| 1.4.3 GolS在种子脱水和萌发中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4.4 GolS其他方面的功能 | 第17页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 2 全基因组范围巨桉GolS基因鉴定及基因结构分析 | 第19-27页 |
| 2.1 数据来源 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 巨桉GT8超基因家族成员鉴定 | 第19页 |
| 2.2.2 巨桉GT8超基因家族保守结构域分析 | 第19页 |
| 2.2.3 巨桉GT8超家族系统发育进化树的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.4 巨桉GolS基因的鉴定 | 第20页 |
| 2.2.5 巨桉GolS基因结构、染色体定位 | 第20页 |
| 2.2.6 巨桉GolS基因组织特异性表达分析 | 第20页 |
| 2.2.7 巨桉GolS基因启动子顺式作用元件预测 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-26页 |
| 2.3.1 巨桉GT8超基因家族的进化与保守结构域分析 | 第20-22页 |
| 2.3.2 巨桉GolS基因的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3.3 巨桉GolS基因结构与染色体位置分布分析 | 第23-24页 |
| 2.3.4 巨桉GolS组织特异性表达 | 第24-25页 |
| 2.3.5 巨桉GolS基因启动子顺式作用元件分析 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 3 巨桉GolS基因非生物胁迫处理条件下的表达分析 | 第27-35页 |
| 3.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 3.1.2 药品、试剂与主要仪器 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 3.2.1 逆境处理、取样方法 | 第27-28页 |
| 3.2.2 巨桉总RNA提取 | 第28-29页 |
| 3.2.3 模板cDNA的合成 | 第29页 |
| 3.2.4 qRT-PCR的方法 | 第29-30页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第30-34页 |
| 3.3.1 非生物逆境处理巨桉GolS表达分析 | 第30-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 4 巨桉EgrGolS3遗传转化与亚细胞定位 | 第35-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 4.1.2 药品、试剂与主要仪器 | 第35-36页 |
| 4.2 EgrGolS3 GFP融合载体构建 | 第36-40页 |
| 4.2.1 基因扩增 | 第36-37页 |
| 4.2.2 目的片段的凝胶回收 | 第37页 |
| 4.2.3 目的基因与空载体双酶切 | 第37页 |
| 4.2.4 双酶切产物纯化 | 第37-38页 |
| 4.2.5 目的基因与载体连接 | 第38页 |
| 4.2.6 重组质粒转化大肠杆菌、阳性检测及重组质粒提取 | 第38-39页 |
| 4.2.7 重组质粒,空载体转化农杆菌、阳性检测 | 第39-40页 |
| 4.2.8 重组质粒侵染烟草 | 第40页 |
| 4.2.9 激光共聚焦显微镜观察 | 第40页 |
| 4.3 植物超表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 4.3.1 基因扩增 | 第40页 |
| 4.3.2 目的片段的凝胶回收 | 第40页 |
| 4.3.3 目的片段与载体的连接 | 第40-41页 |
| 4.3.4 重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第41页 |
| 4.3.5 挑克隆与菌液PCR检测 | 第41-42页 |
| 4.3.6 重组质粒的提取 | 第42页 |
| 4.3.7 LR反应制备植物表达终载体 | 第42-43页 |
| 4.3.8 重组终载体转化大肠杆菌、阳性检测及重组质粒提取 | 第43页 |
| 4.3.9 重组质粒转化农杆菌、阳性检测 | 第43页 |
| 4.4 转基因拟南芥的获得 | 第43-46页 |
| 4.4.1 遗传转化拟南芥 | 第43页 |
| 4.4.2 转基因纯合株系的筛选 | 第43-45页 |
| 4.4.3 EgrGolS3半定量分析 | 第45页 |
| 4.4.4 EgrGolS3酶活性测定 | 第45页 |
| 4.4.5 EgrGolS3超表达株系糖含量测定 | 第45-46页 |
| 4.5 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.5.1 EgrGolS3-GFP超表达载体的构建 | 第46页 |
| 4.5.2 EgrGol3亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 4.5.3 EgrGolS3-35S超表达载体的构建 | 第47页 |
| 4.5.4 转基因拟南芥的鉴定 | 第47-48页 |
| 4.5.5 EgrGolS3半定量结果 | 第48页 |
| 4.5.6 肌醇半乳糖苷合成酶浓度测定 | 第48页 |
| 4.5.7 EgrGolS3超表达转基因株系相关代谢产物含量测定 | 第48-49页 |
| 4.6 讨论 | 第49-50页 |
| 5 EgrGolS3超表达对非生物逆境响应和对成花的影响 | 第50-61页 |
| 5.1 非生物逆境处理条件下转基因拟南芥种子发芽率统计 | 第50页 |
| 5.2 转基因拟南芥植株非生物逆境处理 | 第50-51页 |
| 5.2.1 低温处理 | 第50页 |
| 5.2.2 高盐处理 | 第50页 |
| 5.2.3 干旱实验与叶片离体实验 | 第50-51页 |
| 5.3 蔗糖处理下花青素含量测定 | 第51页 |
| 5.4 EgrGolS3超表达转基因植株的表型观察 | 第51页 |
| 5.5 成花途径相关基因表达分析 | 第51-52页 |
| 5.5.1 正常条件培养 | 第51页 |
| 5.5.2 短日照下处理后开花相关基因分析 | 第51-52页 |
| 5.5.3 不同叶位FT、CO基因表达水平 | 第52页 |
| 5.6 数据处理 | 第52页 |
| 5.7 结果与分析 | 第52-60页 |
| 5.7.1 转基因拟南芥植株非生物逆境处理 | 第52-54页 |
| 5.7.2 转基因拟南芥种子非生物逆境处理 | 第54-55页 |
| 5.7.3 花青素含量测定 | 第55-56页 |
| 5.7.4 转基因株系成花、结顶提前 | 第56-57页 |
| 5.7.5 正常条件下转基因株系开花相关基因定量表达 | 第57-58页 |
| 5.7.6 短日照处理条件下转基因株系成花相关基因定量表达 | 第58-59页 |
| 5.7.7 幼叶中FT、CO的表达 | 第59-60页 |
| 5.8 讨论 | 第60-61页 |
| 6 小结与展望 | 第61-63页 |
| 6.1 小结 | 第61页 |
| 6.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 个人简介 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
