| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| ·阿维菌素及其衍生物 | 第14-15页 |
| ·阿维菌素及其衍生物甲氨基阿维菌素苯甲酸盐 | 第14-15页 |
| ·阿维菌素结构修饰酶 CYP 107Z | 第15页 |
| ·细胞色素 P450 酶系统 | 第15-17页 |
| ·细胞色素 P450 | 第15-16页 |
| ·铁氧还蛋白 | 第16页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶 | 第16-17页 |
| ·链霉菌细胞色素 P450 的电子传递途径 | 第17-18页 |
| ·基因功能的研究策略 | 第18-19页 |
| ·基因功能研究方法的介绍 | 第18页 |
| ·链霉菌基因功能研究方法 | 第18-19页 |
| ·本研究的立题依据、目的意义与技术路线 | 第19-21页 |
| ·本研究的立题依据 | 第19页 |
| ·本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| ·本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 铁氧还蛋白基因的克隆、表达及功能验证 | 第21-40页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂和生物酶 | 第21页 |
| ·培养基与抗生素 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-32页 |
| ·链霉菌基因组 DNA 提取 | 第24页 |
| ·铁氧还蛋白基因的克隆 | 第24-26页 |
| ·铁氧还蛋白基因 fd68 的序列分析 | 第26页 |
| ·fd68 原核表达载体构建 | 第26-28页 |
| ·重组蛋白 Fd68 的诱导表达与纯化 | 第28-29页 |
| ·基因破坏载体 pKC1139：：fd68 的构建 | 第29-30页 |
| ·pKC1139：：fd68 转化 S. ahygroscopicus 原生质体 | 第30页 |
| ·S. ahygroscopicus fd68 基因破坏子的获得与验证 | 第30-31页 |
| ·fd68 基因破坏突变株的生物学特性分析 | 第31页 |
| ·HPLC 检测 fd68 基因破坏突变株氧化阿维菌素活性 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·链霉菌基因组提取 | 第32页 |
| ·铁氧还蛋白基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·铁氧还蛋白基因的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·fd68 基因原核表达载体构建 | 第33-35页 |
| ·Fd68 重组蛋白的表达及纯化 | 第35页 |
| ·fd68 基因破坏突变株获得与验证 | 第35-36页 |
| ·fd68 基因破坏突变株生物学特性分析 | 第36-37页 |
| ·fd68 基因破坏突变株氧化阿维菌素活性分析 | 第37-38页 |
| ·小结与讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 铁氧还蛋白还原酶基因的克隆、表达与活性分析 | 第40-57页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·主要试剂和生物酶 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·溶液配制 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-48页 |
| ·链霉菌基因组 DNA 提取 | 第41-42页 |
| ·功能基因克隆 | 第42页 |
| ·Tail-PCR 扩增获取目的基因侧翼序列 | 第42-44页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶基因的生物信息学分析 | 第44页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶基因的原核表达载体构建 | 第44-46页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶的光谱学特性检测 | 第47页 |
| ·DCPIP 评价铁氧还蛋白还原酶的活性 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-56页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶 fre18、fre28 的克隆 | 第48页 |
| ·铁氧还蛋白还原酶基因的生物信息学分析 | 第48-52页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白 FRE18、FRE28 的纯化与光谱学分析 | 第53-55页 |
| ·重组蛋白 FRE18 与 FRE28 的活性分析 | 第55-56页 |
| ·小结与讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 全细胞氧化阿维菌素体系的建立和验证 | 第57-67页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第57页 |
| ·主要试剂和生物酶 | 第57页 |
| ·培养基与抗生素 | 第57页 |
| ·引物设计 | 第57页 |
| ·溶液配制 | 第57页 |
| ·仪器 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-61页 |
| ·cyp107z13 表达载体 pRET-z13 的构建 | 第58-59页 |
| ·Fd68 与 FRE 共表达载体 pDuet-fd-fre18、pDuet-fd-fre28 的构建 | 第59页 |
| ·表达载体共转化 E. coli 和转化子筛选 | 第59-60页 |
| ·共表达体系蛋白的诱导表达 | 第60页 |
| ·E. coli 转化子全细胞氧化阿维菌素的活性分析 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·cyp107z13 表达载体构建 | 第61-62页 |
| ·共表达载体构建 | 第62-64页 |
| ·E. coli 共表达转化子的筛选和验证 | 第64-65页 |
| ·E. coli 共表达转化子全细胞氧化维菌素活性分析 | 第65-66页 |
| ·小结与讨论 | 第66-67页 |
| 第五章 全文结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录1 | 第74-75页 |
| 附录2 | 第75-76页 |
| 附录3 | 第76-77页 |
| 附录4 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简历 | 第79页 |
