| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·萜类物质的研究进展 | 第11-17页 |
| ·萜类概述 | 第11页 |
| ·萜类的定义和分类 | 第11-14页 |
| ·萜类的分布 | 第14页 |
| ·萜类的存在形式 | 第14-15页 |
| ·萜类生物合成基本原理 | 第15-17页 |
| ·萜类物质合成途径相关基因的研究 | 第17-19页 |
| 第2章 引言 | 第19-21页 |
| ·研究的背景和意义 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第3章 蜡梅CpIPI基因的克隆及序列分析 | 第21-35页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要实验材料 | 第21页 |
| ·主要化学试剂和试剂盒 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·自配的主要试剂和培养基 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·EST序列特征分析 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·蜡梅总DNA的提取和纯化 | 第23-24页 |
| ·CpIPI基因PCR克隆与测序 | 第24-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·CTAB法提取蜡梅的基因组DNA | 第27页 |
| ·目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·CpIPI基因序列分析 | 第28-29页 |
| ·CpIPI编码蛋白的多序列比对和进化树分析 | 第29-30页 |
| ·CpIPI基因编码蛋白的结构分析 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第4章 蜡梅CpIPI基因转录的实时荧光定量分析 | 第35-47页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·蜡梅组织的采集 | 第35-36页 |
| ·蜡梅不同时期花芽的采集 | 第36页 |
| ·总RNA提取 | 第36-37页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第37页 |
| ·实时荧光定量的操作 | 第37-38页 |
| ·CpIPI基因表达的荧光定量分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-45页 |
| ·总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·CpIPI基因表达特性分析 | 第39-42页 |
| ·CpIPI基因表达的实时荧光定量分析 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第5章 植物表达载体的构建和转基因烟草的获得与分析 | 第47-63页 |
| ·技术路线 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·主要仪器及生化试剂 | 第47页 |
| ·常用溶液配方 | 第47-48页 |
| ·常用培养基 | 第48页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301g-CpIPI的构建 | 第48-50页 |
| ·菌液制备 | 第48-49页 |
| ·质粒的提取和检测 | 第49-50页 |
| ·双酶切、连接和转化 | 第50页 |
| ·表达载体转化根癌农杆菌GV3101 | 第50-52页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第50-51页 |
| ·转化农杆菌的验证 | 第51-52页 |
| ·农杆菌介导外源基因导入植物 | 第52-53页 |
| ·烟草转化 | 第52页 |
| ·转基因烟草的移栽 | 第52页 |
| ·转基因植株的检测 | 第52-53页 |
| ·CpIPI基因在转基因烟草中的转录水平分析 | 第53页 |
| ·烟草转录水平分析的实验方法 | 第53页 |
| ·转基因烟草中萜类物质的定量分析 | 第53-55页 |
| ·齐墩果酸溶液的制备 | 第53页 |
| ·烟草叶片组织萜类提取物溶液的制备 | 第53-54页 |
| ·齐墩果酸最大吸收波长的确定 | 第54页 |
| ·标准曲线的制定 | 第54页 |
| ·转基因烟草样品及对照的萜类物质测定 | 第54页 |
| ·稳定性试验 | 第54页 |
| ·精密度试验 | 第54页 |
| ·烟草叶片萜类物质回收率实验 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·植物表达载体转化根癌农杆菌GV3101 | 第56-57页 |
| ·CpIPI基因转化烟草以及转化植株的获得 | 第57-58页 |
| ·CpIPI基因在转基因烟草中的转录水平分析 | 第58-59页 |
| ·转基因烟草中的萜类物质的定量分析 | 第59-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 第6章 总结 | 第63-67页 |
| ·生物信息学分析 | 第63页 |
| ·CpIPI基因在蜡梅中转录水平的分析 | 第63-64页 |
| ·植物表达载体的构建和转基因烟草的获得与分析 | 第64-67页 |
| ·植物表达载体的构建与转基因植株的获得 | 第64页 |
| ·转基因烟草的CpIPI转录水平分析 | 第64页 |
| ·转基因烟草萜类物质的定量分析 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |