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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白配体结合表位多肽的原核表达及功能的研究

致谢第1-11页
中文摘要第11-13页
Abstract第13-15页
第1章 文献综述第15-24页
   ·传染性法氏囊病的研究进展第15-20页
     ·IBDV 的分类、形态结构及理化特性第15页
     ·IBDV 基因组结构第15-16页
     ·IBDV 的病毒蛋白及其功能第16-17页
     ·IBDV 的增殖第17-18页
     ·IBDV 致病机理第18-19页
     ·IBDV 免疫及免疫抑制第19-20页
   ·IBDV 配体和受体的研究进展第20-21页
     ·IBDV 受体的研究进展第20页
     ·IBDV 配体的研究进展第20-21页
   ·IBDV 诊断技术的研究进展第21-24页
     ·病毒分离与鉴定第21页
     ·琼脂扩散试验(AGP)第21-22页
     ·酶联免疫吸附实验(ELISA)第22页
     ·病毒中和实验第22页
     ·多聚酶链反应(PCR)第22-23页
     ·免疫印迹(Western blot)第23-24页
第2章 IBDV VP2 蛋白配体结合表位多肽P22 在大肠杆菌中的表达及鉴定第24-38页
   ·材料与方法第24-31页
     ·试验材料第24页
     ·质粒、菌株第24页
     ·主要仪器第24-25页
     ·主要试剂第25页
     ·主要缓冲液和培养基的配制第25-26页
     ·目的基因 P22 的获得第26页
     ·重组质粒的构建第26-28页
     ·重组质粒pET28a-P22 的原核表达第28页
     ·表达产物的鉴定第28-29页
     ·表达多肽P22 的变性与复性第29-30页
     ·复性多肽与 CEF 细胞结合实验第30-31页
   ·结果第31-35页
     ·合成基因双酶切鉴定结果第31-32页
     ·重组质粒酶切鉴定结果第32页
     ·重组质粒 PET28-P22 诱导表达第32-33页
     ·重组蛋白的可溶性分析第33页
     ·pET28a-P22 重组蛋白的Western blot 检测结果第33-34页
     ·复性多肽 SDS-PAGE 电泳鉴定第34-35页
     ·复性多肽与CEF 细胞结合结果第35页
   ·讨论第35-37页
     ·关于表达系统的选择第35-36页
     ·关于表达载体的选择第36页
     ·关于包涵体的形成第36页
     ·P22 重组蛋白的表达第36页
     ·复性多肽与CEF 细胞结合实验第36-37页
   ·小结第37-38页
第3章 IBDV VP2 蛋白配体结合表位多肽的合成第38-47页
   ·材料与方法第38-43页
     ·主要仪器和试剂第38页
     ·多肽的设计第38-39页
     ·Fmoc 固相多肽合成第39-43页
     ·合成多肽的沉淀及脱盐纯化第43页
     ·合成多肽的纯度和结构特性鉴定第43页
   ·结果第43-44页
     ·质谱鉴定合成多肽结果第43-44页
   ·讨论第44-46页
     ·关于固相多肽合成第44页
     ·合成多肽的溶解和保存第44-45页
     ·影响多肽合成的困难因素分析第45-46页
     ·P22/P221 多肽的合成第46页
   ·小结第46-47页
第4章 IBDV VP2 蛋白配体表位多肽免疫及鉴定第47-61页
   ·前言第47-48页
   ·材料和方法第48-52页
     ·试验材料第48页
     ·主要仪器第48页
     ·主要试剂第48页
     ·主要储备液的制备第48页
     ·多肽分别与载体蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)的偶联第48-50页
     ·动物免疫第50页
     ·配体表位多肽抗体的ELISA 检测第50页
     ·夹心 ELISA 检测多肽抗体第50-51页
     ·抗多肽血清鉴定多肽与 CEF 细胞结合实验第51页
     ·抗多肽抗体的病毒中和试验第51-52页
   ·结果第52-58页
     ·SDS-PAGE 鉴定多肽与载体偶联结果第52-53页
     ·抗多肽抗体的间接ELISA 检测结果第53-55页
     ·夹心 ELISA 检测小鼠抗多肽血清与IBDV 的反应性结果第55页
     ·抗多肽血清鉴定多肽与 CEF 细胞结合实验第55-56页
     ·免疫组化鉴定抗多肽血清抑制病毒与 CEF 细胞结合结果第56-58页
   ·讨论第58-60页
     ·多肽与载体偶联方法第58页
     ·关于多肽-载体偶联物第58-59页
     ·关于免疫剂量及佐剂第59-60页
     ·抗多肽血清鉴定多肽与CEF 结合和病毒中和试验第60页
   ·小结第60-61页
全文结论第61-62页
参考文献第62-68页
附录A 缩略词表第68-70页
附录B 攻读硕士学位期间研究成果第70页

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