致谢 | 第1-11页 |
中文摘要 | 第11-13页 |
Abstract | 第13-15页 |
第1章 文献综述 | 第15-24页 |
·传染性法氏囊病的研究进展 | 第15-20页 |
·IBDV 的分类、形态结构及理化特性 | 第15页 |
·IBDV 基因组结构 | 第15-16页 |
·IBDV 的病毒蛋白及其功能 | 第16-17页 |
·IBDV 的增殖 | 第17-18页 |
·IBDV 致病机理 | 第18-19页 |
·IBDV 免疫及免疫抑制 | 第19-20页 |
·IBDV 配体和受体的研究进展 | 第20-21页 |
·IBDV 受体的研究进展 | 第20页 |
·IBDV 配体的研究进展 | 第20-21页 |
·IBDV 诊断技术的研究进展 | 第21-24页 |
·病毒分离与鉴定 | 第21页 |
·琼脂扩散试验(AGP) | 第21-22页 |
·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第22页 |
·病毒中和实验 | 第22页 |
·多聚酶链反应(PCR) | 第22-23页 |
·免疫印迹(Western blot) | 第23-24页 |
第2章 IBDV VP2 蛋白配体结合表位多肽P22 在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第24-38页 |
·材料与方法 | 第24-31页 |
·试验材料 | 第24页 |
·质粒、菌株 | 第24页 |
·主要仪器 | 第24-25页 |
·主要试剂 | 第25页 |
·主要缓冲液和培养基的配制 | 第25-26页 |
·目的基因 P22 的获得 | 第26页 |
·重组质粒的构建 | 第26-28页 |
·重组质粒pET28a-P22 的原核表达 | 第28页 |
·表达产物的鉴定 | 第28-29页 |
·表达多肽P22 的变性与复性 | 第29-30页 |
·复性多肽与 CEF 细胞结合实验 | 第30-31页 |
·结果 | 第31-35页 |
·合成基因双酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
·重组质粒酶切鉴定结果 | 第32页 |
·重组质粒 PET28-P22 诱导表达 | 第32-33页 |
·重组蛋白的可溶性分析 | 第33页 |
·pET28a-P22 重组蛋白的Western blot 检测结果 | 第33-34页 |
·复性多肽 SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第34-35页 |
·复性多肽与CEF 细胞结合结果 | 第35页 |
·讨论 | 第35-37页 |
·关于表达系统的选择 | 第35-36页 |
·关于表达载体的选择 | 第36页 |
·关于包涵体的形成 | 第36页 |
·P22 重组蛋白的表达 | 第36页 |
·复性多肽与CEF 细胞结合实验 | 第36-37页 |
·小结 | 第37-38页 |
第3章 IBDV VP2 蛋白配体结合表位多肽的合成 | 第38-47页 |
·材料与方法 | 第38-43页 |
·主要仪器和试剂 | 第38页 |
·多肽的设计 | 第38-39页 |
·Fmoc 固相多肽合成 | 第39-43页 |
·合成多肽的沉淀及脱盐纯化 | 第43页 |
·合成多肽的纯度和结构特性鉴定 | 第43页 |
·结果 | 第43-44页 |
·质谱鉴定合成多肽结果 | 第43-44页 |
·讨论 | 第44-46页 |
·关于固相多肽合成 | 第44页 |
·合成多肽的溶解和保存 | 第44-45页 |
·影响多肽合成的困难因素分析 | 第45-46页 |
·P22/P221 多肽的合成 | 第46页 |
·小结 | 第46-47页 |
第4章 IBDV VP2 蛋白配体表位多肽免疫及鉴定 | 第47-61页 |
·前言 | 第47-48页 |
·材料和方法 | 第48-52页 |
·试验材料 | 第48页 |
·主要仪器 | 第48页 |
·主要试剂 | 第48页 |
·主要储备液的制备 | 第48页 |
·多肽分别与载体蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)的偶联 | 第48-50页 |
·动物免疫 | 第50页 |
·配体表位多肽抗体的ELISA 检测 | 第50页 |
·夹心 ELISA 检测多肽抗体 | 第50-51页 |
·抗多肽血清鉴定多肽与 CEF 细胞结合实验 | 第51页 |
·抗多肽抗体的病毒中和试验 | 第51-52页 |
·结果 | 第52-58页 |
·SDS-PAGE 鉴定多肽与载体偶联结果 | 第52-53页 |
·抗多肽抗体的间接ELISA 检测结果 | 第53-55页 |
·夹心 ELISA 检测小鼠抗多肽血清与IBDV 的反应性结果 | 第55页 |
·抗多肽血清鉴定多肽与 CEF 细胞结合实验 | 第55-56页 |
·免疫组化鉴定抗多肽血清抑制病毒与 CEF 细胞结合结果 | 第56-58页 |
·讨论 | 第58-60页 |
·多肽与载体偶联方法 | 第58页 |
·关于多肽-载体偶联物 | 第58-59页 |
·关于免疫剂量及佐剂 | 第59-60页 |
·抗多肽血清鉴定多肽与CEF 结合和病毒中和试验 | 第60页 |
·小结 | 第60-61页 |
全文结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-68页 |
附录A 缩略词表 | 第68-70页 |
附录B 攻读硕士学位期间研究成果 | 第70页 |