| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一部分 人 tensin2 SH2结构域溶液结构及其与非磷酸化酪氨酸依赖的DLC-1结合特性 | 第13-61页 |
| 第一章 研究背景介绍 | 第13-29页 |
| ·SH2蛋白结构域 | 第13-20页 |
| ·SH2结构域的分布 | 第13-14页 |
| ·SH2结构域的功能 | 第14-15页 |
| ·SH2结构域与配体识别的结构基础 | 第15-20页 |
| ·tensin蛋白家族 | 第20-24页 |
| ·tensin蛋白的分子结构特征 | 第20-22页 |
| ·tensin蛋白的合成和降解 | 第22页 |
| ·tensin蛋白家族的生物学功能 | 第22-24页 |
| ·tensin2 SH2与DLC-1的相互作用 | 第24-29页 |
| ·肿瘤抑制蛋白DLC-1 | 第25-26页 |
| ·tensin2蛋白 | 第26页 |
| ·tensin2 SH2结构域与DLC-1的相互作用 | 第26-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-37页 |
| ·序列分析 | 第29页 |
| ·tensin2 SH2结构域的克隆,表达和纯化 | 第29-31页 |
| ·tensin2 SH2结构域体外表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·tensin2 SH2结构域重组蛋白的表达纯化 | 第30页 |
| ·定点突变实验 | 第30-31页 |
| ·tensin2 SH2结构域的核磁共振数据采集及结构计算 | 第31-32页 |
| ·表面等离子共振实验(surface plasmon resonance,SPR) (廖善晖完成) | 第32-33页 |
| ·活化传感芯片并与磷酸化/非磷酸化肽段偶联 | 第32-33页 |
| ·检测野生型及突变体tensin2 SH2结构域与配体之间的结合 | 第33页 |
| ·圆二色谱分析(circular dichroism spectroscopy,CD)(廖善晖完成) | 第33-34页 |
| ·化学位移扰动实验 | 第34-37页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第37-53页 |
| ·tensin2 SH2结构域与其它SH2结构域及tensin蛋白家族之间SH2结构域的序列比对 | 第37页 |
| ·tensin2 SH2结构域与DLC-1肽段的相互作用(廖善晖完成) | 第37-39页 |
| ·tensin2 SH2结构域及其与DLC-1肽段结合时的二级结构分析(廖善晖完成) | 第39-40页 |
| ·tensin2 SH2结构域的溶液三维结构 | 第40-45页 |
| ·tensin2 SH2结构域的核磁波谱谱峰认证 | 第40页 |
| ·tensin2 SH2结构域的溶液三维结构 | 第40-44页 |
| ·tensin2 SH2结构域与SAP SH2结构域的结构比较 | 第44-45页 |
| ·tensin2 SH2结构域中参与DLC-1肽段识别的氨基酸残基鉴定 | 第45-50页 |
| ·tensin2 SH2结构域中参与非磷酸化酪氨酸配体识别的氨基酸残基 | 第45-47页 |
| ·tensin2 SH2结构域中参与磷酸化酪氨酸配体识别的氨基酸残基 | 第47-48页 |
| ·tensin2 SH2结构域中氨基酸残基Tyr41对DLC-1肽段识别的影响 | 第48-49页 |
| ·tensin2 SH2结构域中参与DLC-1肽段识别氨基酸残基分布 | 第49-50页 |
| ·分析与讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 第二部分 布氏锥虫肌动蛋白解聚因子TbCof的结构与功能研究 | 第61-121页 |
| 第四章 研究背景介绍 | 第61-81页 |
| ·肌动蛋白解聚因子同源(ADF-H)结构域蛋白 | 第61-69页 |
| ·肌动蛋白 | 第61-62页 |
| ·ADF-H结构域蛋白的特征 | 第62-65页 |
| ·ADF-H结构域蛋白的actin调节活性 | 第65-69页 |
| ·ADF/cofilin是细胞内的重要功能蛋白质 | 第69-74页 |
| ·ADF/cofilin对肌动蛋白的动力学调节功能 | 第70-72页 |
| ·ADF/cofilin能够转运actin至细胞核 | 第72-73页 |
| ·ADF/cofilin能够诱导细胞色素C的释放 | 第73页 |
| ·ADF/cofilin能够激活磷脂酶D1(PLD1) | 第73-74页 |
| ·ADF/cofilin活性的调节 | 第74-78页 |
| ·磷酸化调节 | 第74-75页 |
| ·pH和4,5二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)的调节 | 第75-76页 |
| ·氧化的调节 | 第76-77页 |
| ·其它蛋白的调节 | 第77-78页 |
| ·布氏锥虫(Trypanosoma brucei)的肌动蛋白解聚因子(TbCof) | 第78-81页 |
| 第五章 实验材料与方法 | 第81-93页 |
| ·重组TbCof的克隆,表达和纯化 | 第81-82页 |
| ·TbCof表达载体的构建 | 第81页 |
| ·重组TbCof的体外表达与纯化 | 第81-82页 |
| ·核磁共振数据的收集处理及结构计算 | 第82页 |
| ·化学位移扰动实验 | 第82页 |
| ·等温微量热(ITC)实验 | 第82-83页 |
| ·TbCof-G-actin HADDOCK模型的计算 | 第83-84页 |
| ·兔肌肌动蛋白的分离纯化 | 第84-87页 |
| ·兔肌丙酮粉的制备 | 第84-85页 |
| ·actin的纯化 | 第85-87页 |
| ·TbCof与F-actin的共沉实验 | 第87-88页 |
| ·TbCof对F-actin的结合和解聚作用 | 第88页 |
| ·pH条件对TbCof的F-actin的结合和解聚作用的影响 | 第88页 |
| ·TbCof与F-actin的电镜实验 | 第88-89页 |
| ·细胞实验 | 第89-93页 |
| ·前循环型布氏锥虫(procyclic-form T.brucei)的培养 | 第89页 |
| ·TbCof过表达细胞系的构建 | 第89页 |
| ·TbCof的RNA干扰细胞系构建 | 第89-90页 |
| ·半定量RT-PCR | 第90页 |
| ·蛋白质印迹实验(Western blot) | 第90-91页 |
| ·免疫荧光显微技术 | 第91-93页 |
| 第六章 实验结果与讨论 | 第93-113页 |
| ·不同物种ADF/cofilin蛋白的序列比对 | 第93-94页 |
| ·TbCof的溶液结构分析 | 第94-100页 |
| ·TbCof的谱峰认证及二级结构预测 | 第94-95页 |
| ·TbCof的溶液空间结构 | 第95-99页 |
| ·TbCof与其它ADF/cofilin的结构比较 | 第99-100页 |
| ·TbCof与肌动蛋白单体(G-actin)之间的相互作用 | 第100-102页 |
| ·TbCof与G-actin之间存在相互作用 | 第100-101页 |
| ·TbCof与G-actin之间相互作用的动力学分析 | 第101-102页 |
| ·TbCof与G-actin复合物的分子模型 | 第102-105页 |
| ·TbCof对肌动蛋白纤维(F-actin)的解聚作用 | 第105-108页 |
| ·TbCof具有解聚F-actin的功能 | 第105-106页 |
| ·TbCof的F-actin解聚功能不受pH影响 | 第106-107页 |
| ·TbCof使F-actin解聚的电镜实验 | 第107-108页 |
| ·TbCof的RNA干扰和细胞定位 | 第108-110页 |
| ·TbCof的RNA干扰不影响细胞生长 | 第108-109页 |
| ·TbCof主要定位在细胞质中 | 第109-110页 |
| ·分析与讨论 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-121页 |
| 附录 | 第121-149页 |
| 致谢 | 第149-151页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其它研究成果 | 第151页 |
