| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-73页 |
| 第一节 禽类原始生殖细胞的研究进展 | 第21-30页 |
| ·干细胞的起源 | 第22页 |
| ·干细胞的生物学特性 | 第22-24页 |
| ·禽类PGC的特性 | 第24-25页 |
| ·PGC的起源 | 第25-26页 |
| ·禽类PGC的迁移 | 第26-27页 |
| ·原始生殖细胞的应用 | 第27-29页 |
| ·PGC作为研究胚胎发育的体外模型 | 第28页 |
| ·PGC在种质资源保护中的应用 | 第28页 |
| ·转基因家禽的制备 | 第28-29页 |
| ·药物生产 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第二节 细胞外基质对PGC迁移的影响及调控 | 第30-36页 |
| ·粘附蛋白的结构和影响因素 | 第30-31页 |
| ·E-钙粘蛋白的结构和功能调节 | 第31-32页 |
| ·E-钙粘蛋白生物学特性 | 第31-32页 |
| ·E-钙粘蛋白/连锁蛋白复合体的生物学特性 | 第32页 |
| ·E-钙粘蛋白的调控 | 第32页 |
| ·粘附分子在细胞信号传导中的作用 | 第32-33页 |
| ·粘附分子在生殖细胞发育中的作用 | 第33-34页 |
| ·ECM在PGC迁移中的作用 | 第34-36页 |
| 第三节 禽类原始生殖细胞增殖的调控 | 第36-45页 |
| ·PGC的增殖 | 第36-37页 |
| ·生长因子对PGC增殖的调控 | 第37-40页 |
| ·白血病抑制因子 | 第37-38页 |
| ·干细胞生长因子 | 第38页 |
| ·碱性成纤维生长因子 | 第38页 |
| ·肿瘤坏死因子TNF-α和cAMP | 第38-39页 |
| ·维甲酸(RA) | 第39页 |
| ·其它细胞因子 | 第39页 |
| ·负调控因子 | 第39-40页 |
| ·细胞信号通路对PGC增殖的调控 | 第40-44页 |
| ·LIF信号通路 | 第41-42页 |
| ·BMP信号通路 | 第42页 |
| ·Wnt途径 | 第42页 |
| ·Oct4 | 第42-43页 |
| ·Nanog | 第43页 |
| ·Sox2 | 第43页 |
| ·NF-κB信号 | 第43-44页 |
| ·细胞周期相关基因控制PGC的增殖 | 第44-45页 |
| 第四节 禽类原始生殖细胞分化的调控 | 第45-58页 |
| ·禽类性腺发育 | 第46-49页 |
| ·胚胎性腺的基本过程 | 第46-47页 |
| ·PGC与性腺发生和发育的关系 | 第47-49页 |
| ·禽类性腺发育的调控及其机理 | 第49-55页 |
| ·减数分裂 | 第49-50页 |
| ·维甲酸在PGC分化中的调控 | 第50-52页 |
| ·Nanos2和PGC分化 | 第52-53页 |
| ·FGF9在PGC分化中的调控 | 第53-55页 |
| ·卵母细胞发生的分子调控 | 第55-58页 |
| ·卵母细胞的发生 | 第55-56页 |
| ·禽类卵巢的发育 | 第56-58页 |
| 第五节 利用转基因技术研究生殖细胞发育的调控机理 | 第58-71页 |
| ·转基因鸡的研究现状 | 第58-60页 |
| ·RNA干扰的研究进展 | 第60-64页 |
| ·小RNAs的分类 | 第60页 |
| ·RNAi作用机制 | 第60-61页 |
| ·RNAi作用的特点 | 第61-62页 |
| ·siRNA与shRNA的比较 | 第62页 |
| ·RNA干扰的应用 | 第62-64页 |
| ·转基因鸡的制备方法 | 第64-69页 |
| ·慢病毒感染法 | 第65-67页 |
| ·原始生殖细胞介导法 | 第67页 |
| ·精子载体法 | 第67-68页 |
| ·显微注射法 | 第68-69页 |
| ·RNAi转基因动物的研究 | 第69-71页 |
| ·RNAi转基因动物的研究现状 | 第69页 |
| ·RNAi制备转基因动物的优势 | 第69-70页 |
| ·RNAi转基因动物存在的问题与应用前景 | 第70-71页 |
| 第六节 本研究的目的和内容 | 第71-73页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第71页 |
| ·研究目标及内容 | 第71-73页 |
| 第二章 维甲酸对鸡胚原始生殖细胞粘附调控机理的研究 | 第73-113页 |
| 第一节 鸡胚原始生殖细胞体外培养模型的建立及优化 | 第73-93页 |
| 摘要 | 第73页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·材料与方法 | 第74-83页 |
| ·实验动物 | 第74页 |
| ·主要器材 | 第74-75页 |
| ·主要试剂及配制 | 第75-77页 |
| ·饲养层的制备 | 第77页 |
| ·生殖嵴和性腺PGC的分离、纯化和培养 | 第77-78页 |
| ·血液中PGC的分离、纯化和培养 | 第78-79页 |
| ·鸡胚PGC的染色鉴定 | 第79-80页 |
| ·RT-PCR检测PGC特异基因的表达 | 第80-83页 |
| ·性腺切片免疫组织化学染色 | 第83页 |
| ·结果 | 第83-89页 |
| ·生殖嵴、性腺PGC体外分离培养及鉴定 | 第83-88页 |
| ·血液PGC体外分离培养及鉴定 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-92页 |
| ·PGC的分离及培养 | 第89-90页 |
| ·鸡胚PGC的培养条件 | 第90-91页 |
| ·鸡胚PGC的鉴定 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第二节 维甲酸对鸡胚原始生殖细胞粘附的影响及其机理的研究 | 第93-113页 |
| 摘要 | 第93-94页 |
| ·引言 | 第94-95页 |
| ·材料与方法 | 第95-103页 |
| ·实验动物 | 第95页 |
| ·主要器材 | 第95页 |
| ·主要试剂及配制 | 第95-97页 |
| ·PGC培养及药物处理 | 第97页 |
| ·PGC集落粘附性的检测 | 第97页 |
| ·SSEA-1和β-catenin双标免疫荧光染色 | 第97-98页 |
| ·细胞周期流式分析 | 第98页 |
| ·RNA提取和常规RT-PCR | 第98-100页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第100-101页 |
| ·蛋白质的提取和Western Blot分析 | 第101-103页 |
| ·数据分析 | 第103页 |
| ·结果 | 第103-109页 |
| ·RARs和RA合成酶在PGC及性腺中的表达情况 | 第103-104页 |
| ·RA对PGC粘附性的作用 | 第104-105页 |
| ·PKC在RA对增强PGC问粘附性中的介导作用 | 第105-106页 |
| ·β-catenin在RA增强PGC粘附性中的介导作用 | 第106-107页 |
| ·RA在体外对PGC增殖的影响 | 第107页 |
| ·PKC在RA对PGC促增殖中的作用 | 第107-108页 |
| ·RA对细胞周期蛋白mRNA表达水平的影响 | 第108-109页 |
| ·RA在体外对PGC细胞周期的影响 | 第109页 |
| ·讨论 | 第109-112页 |
| ·小结 | 第112-113页 |
| 第三章 维甲酸对鸡胚原始生殖细胞增殖调控的研究 | 第113-125页 |
| 摘要 | 第113页 |
| ·引言 | 第113-114页 |
| ·材料与方法 | 第114-117页 |
| ·实验动物 | 第114页 |
| ·主要器材 | 第114-115页 |
| ·主要试剂及配制 | 第115页 |
| ·PGC培养及药物处理 | 第115页 |
| ·BrdU掺入鉴定PGC的增殖 | 第115-116页 |
| ·细胞周期流式分析 | 第116页 |
| ·RNA提取和常规RT-PCR | 第116页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第116-117页 |
| ·蛋白质的提取和Western Blot分析 | 第117页 |
| ·数据分析 | 第117页 |
| ·结果 | 第117-121页 |
| ·RA在体外对PGC增殖的影响 | 第117-118页 |
| ·PI3K/Akt在RA对PGC促增殖中的介导作用 | 第118-119页 |
| ·NF-κB在RA对PGC促增殖中的介导作用 | 第119-120页 |
| ·RA及抑制剂对细胞周期蛋白mRNA表达水平的影响 | 第120-121页 |
| ·RA及抑制剂对PGC细胞周期的影响 | 第121页 |
| ·讨论 | 第121-123页 |
| ·小结 | 第123-125页 |
| 第四章 维甲酸对鸡胚生殖细胞减数分裂调控机理的研究 | 第125-143页 |
| 摘要 | 第125页 |
| ·引言 | 第125-127页 |
| ·材料与方法 | 第127-133页 |
| ·实验动物 | 第127页 |
| ·主要器材 | 第127页 |
| ·主要试剂及配制 | 第127-128页 |
| ·样品采集 | 第128页 |
| ·鸡胚性腺组织培养和处理 | 第128页 |
| ·鸡胚卵巢生殖细胞的分离培养和处理 | 第128-129页 |
| ·Raldh2 siRNA转染 | 第129-130页 |
| ·鸡胚性腺组织的冰冻切片 | 第130页 |
| ·鸡胚性腺组织石蜡切片制作 | 第130页 |
| ·胚胎期卵巢形态学观察 | 第130-131页 |
| ·性腺冰冻切片免疫荧光染色 | 第131页 |
| ·RNA提取和Real-Time RT-PCR | 第131-132页 |
| ·数据分析 | 第132-133页 |
| ·结果 | 第133-140页 |
| ·胚胎期鸡胚卵巢发育的形态学特征 | 第133-135页 |
| ·胚胎期鸡卵巢减数分裂阶段的变化 | 第135-136页 |
| ·减数分裂相关基因表达的在不同时期鸡胚性腺中的表达情况 | 第136页 |
| ·RA合成和降解酶在不同时期鸡胚性腺中的表达情况 | 第136-137页 |
| ·AO染色观察体外培养卵巢的内部结构 | 第137页 |
| ·RA在体外对减数分裂的影响 | 第137-138页 |
| ·Raldh2 shRNA干扰 | 第138-139页 |
| ·Raldh2基因敲减对减数分裂的影响 | 第139-140页 |
| ·讨论 | 第140-141页 |
| ·小结 | 第141-143页 |
| 第五章 利用shRNA慢病毒载体制备转基因鸡模型 | 第143-159页 |
| 摘要 | 第143页 |
| ·引言 | 第143-145页 |
| ·材料与方法 | 第145-152页 |
| ·实验动物 | 第145页 |
| ·主要器材 | 第145页 |
| ·主要试剂及配制 | 第145-146页 |
| ·玻璃针的制备 | 第146页 |
| ·siRNA的设计 | 第146-147页 |
| ·病毒滴度的复核(有限稀释法测定) | 第147页 |
| ·靶细胞感染预实验 | 第147-148页 |
| ·293FT细胞的培养 | 第148-149页 |
| ·病毒的生产 | 第149页 |
| ·病毒滴度分析 | 第149-150页 |
| ·鸡胚病毒注射 | 第150页 |
| ·PCR检测目的基因的表达 | 第150-151页 |
| ·数据分析 | 第151-152页 |
| ·结果 | 第152-155页 |
| ·慢病毒滴度测定结果 | 第152页 |
| ·不同转染时间绿色荧光蛋白的表达分析 | 第152-153页 |
| ·shRNA高效抑制Raldh2复制靶位点的筛选 | 第153-154页 |
| ·转基因个体的PCR分析 | 第154页 |
| ·转基因鸡胚15.5天卵巢形态 | 第154-155页 |
| ·讨论 | 第155-157页 |
| ·小结 | 第157-159页 |
| 第六章 结论和创新点 | 第159-161页 |
| ·结论 | 第159-160页 |
| ·创新点 | 第160-161页 |
| 参考文献 | 第161-187页 |
| 致谢 | 第187-189页 |
| 博士期间发表文章 | 第189页 |
