| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词 | 第10-15页 |
| 1 绪言 | 第15-48页 |
| ·产双酶恶臭假单胞菌的形态及代谢生理 | 第15-16页 |
| ·D-对羟基苯甘氨酸的研究进展 | 第16-21页 |
| ·D-pHPG的性质和作用 | 第16页 |
| ·以D-pHPG为侧链的几种主要药物 | 第16-18页 |
| ·D-pHPG的应用前景 | 第18-19页 |
| ·D-pHPG的制备方法 | 第19-21页 |
| ·海因酶 | 第21-26页 |
| ·海因酶的性质 | 第21-22页 |
| ·海因酶的催化机制 | 第22-24页 |
| ·海因酶基因工程菌研究 | 第24-26页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 | 第26-30页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的性质 | 第26-27页 |
| ·DCase的催化机制 | 第27-28页 |
| ·DCase基因工程菌的研究进展 | 第28-30页 |
| ·高产酶菌株的获得方法及发酵工艺 | 第30-32页 |
| ·海因酶产生菌的筛选 | 第30-31页 |
| ·DCase产生菌的筛选 | 第31页 |
| ·两种酶工程菌研究的比较 | 第31-32页 |
| ·国内外诱变育种研究现状 | 第32-38页 |
| ·诱变方法研究现状 | 第32-37页 |
| ·诱变菌种的筛选 | 第37-38页 |
| ·酶的提取及纯化 | 第38页 |
| ·酶的固定化及应用 | 第38-46页 |
| ·常规酶的固定化方法 | 第39-41页 |
| ·固定化方法的比较及固定化酶的优点 | 第41-42页 |
| ·新型的固定化技术 | 第42-44页 |
| ·多酶系统的共固定化 | 第44页 |
| ·固定化酶在医药及化工等行业的应用 | 第44-46页 |
| ·本论文的工作目的、意义和研究内容 | 第46-48页 |
| ·目的和意义 | 第46页 |
| ·论文工作内容及工艺流程 | 第46-48页 |
| 2 产双酶菌种的验证及N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸的制备 | 第48-62页 |
| ·材料与方法 | 第48-52页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·主要实验试剂 | 第48页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·相关溶液 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-60页 |
| ·菌种的纯化及菌体形态观察 | 第52页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第52-53页 |
| ·产双酶菌种的验证 | 第53-54页 |
| ·培养温度对发酵生物量及产酶活力的影响 | 第54页 |
| ·初始pH对发酵生物量及产酶活力的影响 | 第54-55页 |
| ·温度对双酶活力的影响 | 第55-56页 |
| ·pH对双酶活力的影响 | 第56-58页 |
| ·菌体与底物的适当配比 | 第58页 |
| ·NC-D-pHPG(中间体)的提取 | 第58-60页 |
| ·本章小结 | 第60-62页 |
| 3 紫外结合硫酸二乙酯复合诱变选育高产菌株 | 第62-74页 |
| ·材料与方法 | 第62-66页 |
| ·实验仪器 | 第62页 |
| ·主要实验试剂 | 第62页 |
| ·菌种 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62-63页 |
| ·相关溶液 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-73页 |
| ·UV结合DES复合诱变的致死率 | 第66页 |
| ·UV结合DES复合诱变的突变率 | 第66-68页 |
| ·5-FU的浓度确定 | 第68-69页 |
| ·突变菌株的筛选结果 | 第69-70页 |
| ·突变菌株遗传稳定性考察 | 第70-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 4 低能N~+注入诱变选育高产菌株 | 第74-85页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·实验仪器与设备 | 第74页 |
| ·主要实验试剂 | 第74页 |
| ·菌株 | 第74页 |
| ·培养基 | 第74-75页 |
| ·相关溶液 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-84页 |
| ·不同能量和不同剂量N~+离子注入诱变的存活率 | 第76-77页 |
| ·N~+离子注入诱变的突变率 | 第77-80页 |
| ·突变菌株的诱变及筛选结果 | 第80-81页 |
| ·突变菌株遗传稳定性考察 | 第81-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 5 高产变异株spUDNO706发酵培养条件的优化 | 第85-101页 |
| ·材料与方法 | 第85-88页 |
| ·实验仪器与设备 | 第85页 |
| ·主要实验试剂 | 第85页 |
| ·菌种 | 第85页 |
| ·培养基 | 第85-86页 |
| ·相关溶液 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-88页 |
| ·结果与讨论 | 第88-100页 |
| ·不同碳源的测评结果与分析 | 第88页 |
| ·不同氮源的测评结果与分析 | 第88-89页 |
| ·不同诱导剂的测评结果与分析 | 第89页 |
| ·接种量对菌体的生长及产酶活力的影响 | 第89-90页 |
| ·培养温度对菌体生长及产酶活力的影响 | 第90-92页 |
| ·初始pH值对菌体生长及产酶活力的影响 | 第92-93页 |
| ·摇瓶装量对菌体生长及产酶活力的影响 | 第93-94页 |
| ·发酵培养基的正交实验结果与分析 | 第94-97页 |
| ·优化发酵条件下摇瓶发酵验证高产诱变株产双酶水平 | 第97-98页 |
| ·高产诱变株spUDNO706在5L自动发酵罐的发酵结果 | 第98-100页 |
| ·本章小结 | 第100-101页 |
| 6 双酶的提取纯化和DHase的固定化 | 第101-117页 |
| ·材料与方法 | 第101-106页 |
| ·实验仪器 | 第101页 |
| ·主要实验试剂 | 第101页 |
| ·菌种 | 第101页 |
| ·培养基 | 第101-102页 |
| ·相关溶液 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-106页 |
| ·结果与讨论 | 第106-116页 |
| ·蛋白质的测定结果 | 第106页 |
| ·细胞破碎的压力时间确定 | 第106-107页 |
| ·纯化结果 | 第107-109页 |
| ·电泳结果 | 第109-110页 |
| ·膜分离结果 | 第110-111页 |
| ·海因酶的固定化条件的确定 | 第111-115页 |
| ·DHase在优化固定化条件下的固定化酶活力 | 第115-116页 |
| ·本章小结 | 第116-117页 |
| 7 DHase固定化酶与DCase纯化酶两酶一步法制备D-pHPG | 第117-128页 |
| ·材料与方法 | 第117-119页 |
| ·实验仪器 | 第117页 |
| ·主要实验试剂 | 第117页 |
| ·酶 | 第117页 |
| ·实验方法 | 第117-119页 |
| ·结果与讨论 | 第119-126页 |
| ·pH对DHase固定化酶及DCase纯化酶活性的影响 | 第119-120页 |
| ·温度对DHase固定化酶及DCase纯化酶活性的影响 | 第120-121页 |
| ·金属离子对DHase固定化酶及DCase纯化酶活性的影响 | 第121-122页 |
| ·DHase固定化酶及DCase纯化酶的稳定性考察 | 第122页 |
| ·DHase固定化酶及DCase纯化酶米氏常数的测定 | 第122-123页 |
| ·底物浓度对转化率和收率的影响 | 第123-124页 |
| ·转化温度对转化率和收率的影响 | 第124页 |
| ·多批次转化反应中酶活力衰减及转化率、收率情况 | 第124-126页 |
| ·D-pHPG的精制 | 第126页 |
| ·本章小结 | 第126-128页 |
| 8 主要研究结论与研究展望 | 第128-132页 |
| ·主要研究结论 | 第128-130页 |
| ·创新点 | 第130-131页 |
| ·研究展望 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 攻读学位期间的主要学术成果 | 第143-144页 |
