| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-24页 |
| 1 油菜菌核病发生与防治 | 第10-12页 |
| ·症状 | 第10页 |
| ·病菌 | 第10-11页 |
| ·病害防治 | 第11-12页 |
| 2 油菜菌核病菌重要致病因子 | 第12-15页 |
| ·植物病原真菌一般致病机理 | 第12-13页 |
| ·油菜菌核病菌重要致病因子 | 第13-15页 |
| ·毒素 | 第13-14页 |
| ·酶 | 第14-15页 |
| 3 植物病原真菌多聚半乳糖醛酸酶(PG) | 第15-20页 |
| ·胞壁降解酶 | 第15-17页 |
| ·PG分离纯化 | 第17-18页 |
| ·PG活力检测 | 第18页 |
| ·PG理化特性 | 第18-20页 |
| 4 植物病原真菌PG基因克隆与表达 | 第20-21页 |
| ·基因克隆与序列特征 | 第20页 |
| ·基因表达与调控 | 第20-21页 |
| 5 核盘菌PG及其基因研究 | 第21-22页 |
| 6 本论文研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 材料和方法 | 第24-43页 |
| 1 供试菌株 | 第24页 |
| ·油菜菌核病菌 | 第24页 |
| ·大肠杆菌 | 第24页 |
| 2 培养基 | 第24页 |
| ·PDA培养基 | 第24页 |
| ·改良的Marcus培养基 | 第24页 |
| ·LB培养基 | 第24页 |
| 3 试剂和仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| 4 胞壁降解酶产生与活性的测定 | 第25-28页 |
| ·病菌培养 | 第25-26页 |
| ·粗酶提取 | 第26页 |
| ·酶活测定 | 第26-28页 |
| ·Cx测定 | 第26-27页 |
| ·PG和PMG测定 | 第27页 |
| ·PGTE和PMTE测定 | 第27-28页 |
| 5 PG提取与纯化的方法 | 第28-29页 |
| ·粗酶提取 | 第28-29页 |
| ·DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析 | 第29页 |
| ·Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水层析 | 第29页 |
| ·Sephadex G-75凝胶过滤层析 | 第29页 |
| 6 PG理化性质的测定 | 第29-35页 |
| ·组成分析 | 第29-30页 |
| ·油红-O染色反应 | 第30页 |
| ·蒽酮反应 | 第30页 |
| ·硝肖酸反应 | 第30页 |
| ·含糖量测定 | 第30页 |
| ·分子量测定 | 第30-33页 |
| ·等电点测定 | 第33-34页 |
| ·稳定性测定 | 第34-35页 |
| ·对热稳定性测定 | 第34-35页 |
| ·对酸碱稳定性测定 | 第35页 |
| ·对紫外线稳定性测定 | 第35页 |
| ·对氯仿稳定性测定 | 第35页 |
| ·对蛋白酶稳定性测定 | 第35页 |
| 7 PG基因的克隆 | 第35-40页 |
| ·病菌基因组DNA提取 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR产物纯化 | 第37-38页 |
| ·重组质粒构建 | 第38页 |
| ·E.coli DH5 α感受态细胞制备 | 第38-39页 |
| ·质粒热击转化 | 第39页 |
| ·微量质粒DNA提取 | 第39-40页 |
| ·酶切验证 | 第40页 |
| ·测序 | 第40页 |
| 8 PG基因的原核表达 | 第40-43页 |
| ·表达载体构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒转化 | 第41-42页 |
| ·全细胞蛋白样品制备 | 第42页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| 结果与分析 | 第43-59页 |
| 1 油菜菌核病菌胞壁降解酶的种类与活性 | 第43-45页 |
| ·标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| ·胞壁降解酶的活性 | 第44-45页 |
| 2 油菜菌核病菌PG的提取与纯化 | 第45-47页 |
| ·PG粗蛋白的提取 | 第45页 |
| ·PG蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析结果 | 第45-46页 |
| ·Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水层析结果 | 第46页 |
| ·Sephadex G-75凝胶过滤层析结果 | 第46-47页 |
| 3 油菜菌核病菌PG的组成与理化性质 | 第47-53页 |
| ·PG组成分析 | 第47-49页 |
| ·不含脂 | 第47页 |
| ·含糖基及含糖量 | 第47-48页 |
| ·不含芳香族氨基酸 | 第48-49页 |
| ·PG分子量 | 第49-50页 |
| ·PG等电点 | 第50-51页 |
| ·PG稳定性 | 第51-53页 |
| ·对热稳定性 | 第51页 |
| ·对酸碱稳定性 | 第51-52页 |
| ·对紫外线稳定性 | 第52-53页 |
| ·对氯仿稳定性 | 第53页 |
| ·对蛋白酶稳定性 | 第53页 |
| 4 油菜菌核病菌PG基因的克隆与序列分析 | 第53-56页 |
| ·Sspg1d和Sspg3基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·Sspg1d和Sspg3基因的序列分析 | 第54-56页 |
| 5 油菜菌核病菌PG基因的原核表达 | 第56-59页 |
| ·Sspg1d和Sspg3基因重组质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·Sspg1d和Sspg3基因的原核表达 | 第57-59页 |
| 讨论 | 第59-63页 |
| 1 油菜菌核病菌胞壁降解酶及其作用 | 第59页 |
| 2 油菜菌核病菌PG的提取与纯化 | 第59-60页 |
| 3 油菜菌核病菌PG基因的克隆与序列特征 | 第60-61页 |
| 4 油菜菌核病菌PG基因的表达 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
