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油菜菌核病菌PG的分离纯化、理化性质及PG基因的克隆与表达

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
引言第10-24页
 1 油菜菌核病发生与防治第10-12页
   ·症状第10页
   ·病菌第10-11页
   ·病害防治第11-12页
 2 油菜菌核病菌重要致病因子第12-15页
   ·植物病原真菌一般致病机理第12-13页
   ·油菜菌核病菌重要致病因子第13-15页
     ·毒素第13-14页
     ·酶第14-15页
 3 植物病原真菌多聚半乳糖醛酸酶(PG)第15-20页
   ·胞壁降解酶第15-17页
   ·PG分离纯化第17-18页
   ·PG活力检测第18页
   ·PG理化特性第18-20页
 4 植物病原真菌PG基因克隆与表达第20-21页
   ·基因克隆与序列特征第20页
   ·基因表达与调控第20-21页
 5 核盘菌PG及其基因研究第21-22页
 6 本论文研究目的和意义第22-24页
材料和方法第24-43页
 1 供试菌株第24页
   ·油菜菌核病菌第24页
   ·大肠杆菌第24页
 2 培养基第24页
   ·PDA培养基第24页
   ·改良的Marcus培养基第24页
   ·LB培养基第24页
 3 试剂和仪器第24-25页
   ·主要试剂第24-25页
   ·主要仪器第25页
 4 胞壁降解酶产生与活性的测定第25-28页
   ·病菌培养第25-26页
   ·粗酶提取第26页
   ·酶活测定第26-28页
     ·Cx测定第26-27页
     ·PG和PMG测定第27页
     ·PGTE和PMTE测定第27-28页
 5 PG提取与纯化的方法第28-29页
   ·粗酶提取第28-29页
   ·DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析第29页
   ·Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水层析第29页
   ·Sephadex G-75凝胶过滤层析第29页
 6 PG理化性质的测定第29-35页
   ·组成分析第29-30页
     ·油红-O染色反应第30页
     ·蒽酮反应第30页
     ·硝肖酸反应第30页
   ·含糖量测定第30页
   ·分子量测定第30-33页
   ·等电点测定第33-34页
   ·稳定性测定第34-35页
     ·对热稳定性测定第34-35页
     ·对酸碱稳定性测定第35页
     ·对紫外线稳定性测定第35页
     ·对氯仿稳定性测定第35页
     ·对蛋白酶稳定性测定第35页
 7 PG基因的克隆第35-40页
   ·病菌基因组DNA提取第35-36页
   ·引物设计第36页
   ·PCR扩增第36-37页
   ·PCR产物纯化第37-38页
   ·重组质粒构建第38页
   ·E.coli DH5 α感受态细胞制备第38-39页
   ·质粒热击转化第39页
   ·微量质粒DNA提取第39-40页
   ·酶切验证第40页
   ·测序第40页
 8 PG基因的原核表达第40-43页
   ·表达载体构建第40-41页
   ·重组质粒转化第41-42页
   ·全细胞蛋白样品制备第42页
   ·表达产物SDS-PAGE分析第42-43页
结果与分析第43-59页
 1 油菜菌核病菌胞壁降解酶的种类与活性第43-45页
   ·标准曲线的建立第43-44页
   ·胞壁降解酶的活性第44-45页
 2 油菜菌核病菌PG的提取与纯化第45-47页
   ·PG粗蛋白的提取第45页
   ·PG蛋白的纯化第45-47页
     ·DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析结果第45-46页
     ·Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水层析结果第46页
     ·Sephadex G-75凝胶过滤层析结果第46-47页
 3 油菜菌核病菌PG的组成与理化性质第47-53页
   ·PG组成分析第47-49页
     ·不含脂第47页
     ·含糖基及含糖量第47-48页
     ·不含芳香族氨基酸第48-49页
   ·PG分子量第49-50页
   ·PG等电点第50-51页
   ·PG稳定性第51-53页
     ·对热稳定性第51页
     ·对酸碱稳定性第51-52页
     ·对紫外线稳定性第52-53页
     ·对氯仿稳定性第53页
     ·对蛋白酶稳定性第53页
 4 油菜菌核病菌PG基因的克隆与序列分析第53-56页
   ·Sspg1d和Sspg3基因的克隆第53-54页
   ·Sspg1d和Sspg3基因的序列分析第54-56页
 5 油菜菌核病菌PG基因的原核表达第56-59页
   ·Sspg1d和Sspg3基因重组质粒的构建第56-57页
   ·Sspg1d和Sspg3基因的原核表达第57-59页
讨论第59-63页
 1 油菜菌核病菌胞壁降解酶及其作用第59页
 2 油菜菌核病菌PG的提取与纯化第59-60页
 3 油菜菌核病菌PG基因的克隆与序列特征第60-61页
 4 油菜菌核病菌PG基因的表达第61-63页
参考文献第63-70页
附录第70-73页
致谢第73-74页

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