| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 符号说明 | 第17-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-42页 |
| ·引言 | 第20-21页 |
| ·细菌表面多糖 | 第21-23页 |
| ·E.coli中O-抗原的合成 | 第23-25页 |
| ·起始、延伸、翻转 | 第24页 |
| ·聚合 | 第24-25页 |
| ·连接 | 第25页 |
| ·糖基转移酶 | 第25-26页 |
| ·糖核苷酸供体的合成 | 第26-29页 |
| ·唾液酸及其糖核苷酸的合成 | 第29-34页 |
| ·唾液酸的合成 | 第29-31页 |
| ·CMP-Sia的合成 | 第31-34页 |
| ·唾液酸转移酶及其催化反应机理 | 第34-37页 |
| ·唾液酸转移酶 | 第34-36页 |
| ·唾液酸转移酶的催化反应机理 | 第36-37页 |
| ·唾液酸的生物功能 | 第37-38页 |
| ·唾液酸化肿瘤相关糖抗原 | 第38-39页 |
| ·唾液酸化寡糖的合成 | 第39-42页 |
| ·唾液酸化寡糖的化学合成 | 第39页 |
| ·唾液酸化寡糖的化学酶法合成 | 第39-42页 |
| 第二章 酶法合成唾液酸化寡糖 | 第42-54页 |
| ·引言 | 第42-43页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·菌株、试剂和仪器 | 第43页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·PmST1、Pd2,6ST以及NmCSS的表达与纯化 | 第45-46页 |
| ·NmCSS、PmST1和Pd2,6ST的酶活验证 | 第46页 |
| ·CMP-Neu5Ac的酶法合成与纯化 | 第46-47页 |
| ·Neu5Acα2,3Gal和Neu5Acα2,6lactose的制备 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-52页 |
| ·PmST1、Pd2,6ST以及NmCSS的表达与纯化 | 第48-49页 |
| ·NmCSS、Pd2,6ST以及PmST1的酶活验证 | 第49-50页 |
| ·CMP-Neu5Ac的酶法合成与纯化 | 第50页 |
| ·Neu5Aca2,3Gal 和 Neu5Aca2,61actose 的制备 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 第三章 唾液酸转移酶WfaN的克隆及其催化活性探索 | 第54-74页 |
| ·引言 | 第54-55页 |
| ·实验材料 | 第55-58页 |
| ·菌株和载体 | 第55页 |
| ·酶和试剂 | 第55-56页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第56页 |
| ·引物 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-66页 |
| ·唾液酸转移酶基因wfaN的克隆 | 第58-62页 |
| ·WfaN的表达与纯化 | 第62-64页 |
| ·WfaN的酶活性检测 | 第64-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-70页 |
| ·重组表达质粒pET15b-wfaN、pET22b-wfaN以及pGEX-4T-1-wfaN的构建 | 第66页 |
| ·重组表达质粒pMCSG9-wfaN的构建 | 第66-67页 |
| ·不同表达质粒中WfaN的预表达 | 第67-68页 |
| ·WfaN表达条件的优化 | 第68页 |
| ·MBP-WfaN在重组菌DE3/pG9N中的表达与纯化 | 第68-69页 |
| ·WfaN的酶活检测 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-74页 |
| 第四章 体内基因敲除法探索WfaN的生物功能 | 第74-93页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·实验材料 | 第75-78页 |
| ·酶、试剂及耗材 | 第75页 |
| ·菌株和质粒 | 第75-76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·引物 | 第76-78页 |
| ·实验流程 | 第78-79页 |
| ·wfaO基因的敲除 | 第78页 |
| ·wfaN基因的敲除及其功能的回补和互补 | 第78-79页 |
| ·实验方法 | 第79-85页 |
| ·敲除wfaN基因获得重组子O24/ΔwfaN | 第79-81页 |
| ·敲除wfaO基因获得重组子O24/ΔwfaO | 第81-83页 |
| ·突变型菌株O24/ΔwfaN中蛋白WfaN功能的回补和互补 | 第83-85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-92页 |
| ·敲除wfaN基因获得重组子O24/ΔwfaN | 第85-86页 |
| ·敲除wfaO基因获得重组子 | 第86-88页 |
| ·重组子O24/ΔwfaN和重组子O24/ΔwfaO的LPS银染 | 第88-89页 |
| ·突变型菌株O24/ΔwfaN中蛋白WfaN功能的回补和互补 | 第89-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 全文总结 | 第93-95页 |
| 本文不足之处及改进方法 | 第95-96页 |
| 附录与附图 | 第96-102页 |
| Ⅰ 质粒pMCSG9 LIC(ligation independent cloning)克隆示意图 | 第97-98页 |
| Ⅱ Red重组系统敲除基因的过程示意图 | 第98页 |
| Ⅲ CMP-Neu5Ac的纯度检测 | 第98-99页 |
| Ⅳ Neu5Acα2,3Gal的NMR谱图 | 第99-100页 |
| Ⅴ ESI-MS测定Neu5Acα2,6lactose的分子量 | 第100页 |
| Ⅵ Neu5Acα2,6lactose的NMR谱图 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第115页 |
