| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-6页 |
| 缩略语表 | 第6-12页 |
| 第一章 单核细胞增生性李氏杆菌的研究进展 | 第12-30页 |
| 1 单增李氏杆菌的分布与危害 | 第12页 |
| 2 李氏杆菌的生物学特性 | 第12-14页 |
| ·形态与染色 | 第12-13页 |
| ·培养特性 | 第13页 |
| ·生化培养特性 | 第13页 |
| ·抵抗力 | 第13-14页 |
| 3 LMO的治病机理和流行病学特征 | 第14-15页 |
| ·LMO的致病机理 | 第14-15页 |
| ·流行病学特征 | 第15页 |
| 4 李氏杆菌的分类 | 第15-18页 |
| ·LMO的分类 | 第15-16页 |
| ·LMO的亚分型方法 | 第16-18页 |
| ·传统表型亚分型法 | 第16-17页 |
| ·血清型分型 | 第16页 |
| ·噬菌体分型 | 第16页 |
| ·多区带酶电泳分型(Mutilocus Enzyme Electrophoresis,MEE) | 第16-17页 |
| ·分子亚分型法 | 第17-18页 |
| ·脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE) | 第17页 |
| ·核糖体分型（ribotyping） | 第17页 |
| ·以DNA序列为基础的亚分型 | 第17-18页 |
| 5 LMO的毒力因子 | 第18-21页 |
| ·李氏杆菌溶血素（L isteriolysion O,LLO） | 第18-19页 |
| ·肌动蛋白聚合蛋白（Actin polymerizing protein，ActA） | 第19页 |
| ·细胞壁水解酶（Invasion associated protein，P60）蛋白 | 第19-20页 |
| ·内化素( Internalis) | 第20页 |
| ·磷脂酶C | 第20页 |
| ·PrfA | 第20-21页 |
| ·mpl蛋白 | 第21页 |
| ·表面蛋白P10410 | 第21页 |
| 6 李氏杆菌的检测 | 第21-30页 |
| ·传统的分离检测方法 | 第21-22页 |
| ·显色培养基鉴定技术 | 第22-23页 |
| ·免疫学检测方法 | 第23-25页 |
| ·酶联免疫吸附剂测定（ELISA） | 第23-24页 |
| ·酶联荧光分析法(enzyme linked fluorescent assay,ELFA) | 第24页 |
| ·免疫胶体金层析技术 | 第24页 |
| ·免疫磁珠捕获法 | 第24-25页 |
| ·SPA-ELISA | 第25页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第25-30页 |
| ·核酸探针技术 | 第25页 |
| ·PCR及其相关的检测技术 | 第25-28页 |
| ·多重PCR | 第26页 |
| ·荧光PCR | 第26-27页 |
| ·ERIC-PCR法 | 第27页 |
| ·RT-PCR检测技术 | 第27页 |
| ·IMS-PCR检测方法 | 第27-28页 |
| ·依赖解旋酶的DNA恒温扩增技术 | 第28页 |
| ·依赖核酸序列的扩增技术 | 第28页 |
| ·基因芯片 | 第28-29页 |
| ·环介导等温扩增技术（LAMP） | 第29-30页 |
| 第二章 单核细胞增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析 | 第30-51页 |
| 1 材料与方法 | 第30-42页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·菌株及质粒 | 第30-31页 |
| ·主要试剂及材料 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·培养基及各种溶液的配置 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-42页 |
| ·细菌基因组DNA模板的提取 | 第32-33页 |
| ·引物设计、hlyA基因的扩增 | 第33页 |
| ·PCR产物的克隆及鉴定 | 第33-36页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·阳性克隆菌的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第35-36页 |
| ·pET-hlyA原核重组表达载体的构建及鉴定 | 第36-38页 |
| ·空载体质粒pET-30a(＋)的提取 | 第36-37页 |
| ·空载体pET-30a(＋)和目的片段的酶切 | 第37页 |
| ·空载体pET-30a(＋)和目的片段的连接 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pET-hlyA的表达与SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET-hlyA的表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| ·目的蛋白的优化表达 | 第39-40页 |
| ·重组大肠杆菌的生长曲线 | 第39-40页 |
| ·不同诱导时间对表达的影响 | 第40页 |
| ·不同IPTG浓度对表达的影响 | 第40页 |
| ·不同温度对表达的影响 | 第40页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| ·重组菌的大量表达与菌体破碎 | 第40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| ·间接ELISA检测方法的初步建立 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-49页 |
| ·PCR扩增目的基因结果 | 第42-43页 |
| ·克隆载体的PCR鉴定结果和测序结果 | 第43页 |
| ·重组表达载体pET-hlyA酶切和PCR鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒表达产物SDS-PAGE电泳结果 | 第44-45页 |
| ·重组质粒菌的优化表达 | 第45-48页 |
| ·重组菌的生长曲线 | 第45-46页 |
| ·不同时间对表达产物量的影响 | 第46页 |
| ·不同IPTG浓度对表达的影响 | 第46-47页 |
| ·不同温度对表达的影响 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白纯化后SDS-PAGE结果 | 第48页 |
| ·间接ELISA检测结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论与分析 | 第49-51页 |
| 第三章 单核细胞增生性李氏杆菌溶血素单克隆抗体的制备 | 第51-65页 |
| 1 材料和方法 | 第51-58页 |
| ·材料 | 第51-53页 |
| ·实验动物和细胞 | 第51-52页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第52页 |
| ·主要溶液的配置 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-58页 |
| ·免疫原的制备 | 第53页 |
| ·动物免疫 | 第53页 |
| ·阳性杂交瘤细胞细胞株的筛选 | 第53-57页 |
| ·小鼠免疫效价的测定 | 第53-54页 |
| ·SP2/0的复苏与培养 | 第54页 |
| ·饲养细胞的准备（细胞融合前一天） | 第54页 |
| ·脾细胞的制备 | 第54-55页 |
| ·细胞融合 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞的培养和阳性克隆的筛选 | 第55-56页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的扩大培养及冻存 | 第56-57页 |
| ·单克隆抗体生物学特性的测定 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第57页 |
| ·单克隆抗体的His标签负筛选 | 第57页 |
| ·单克隆抗体亚类的测定 | 第57页 |
| ·单克隆抗体特异性的测定 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体的抗原位点配对分析 | 第58页 |
| ·单克隆抗体稳定性测定 | 第58页 |
| 2 结果 | 第58-62页 |
| ·单克隆抗体筛选方法的建立 | 第58-59页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立与效价测定 | 第59页 |
| ·单抗的His蛋白负筛选 | 第59-60页 |
| ·单抗亚类的测定 | 第60页 |
| ·各株单抗抗原位点配对分析 | 第60页 |
| ·单抗的特异性测定 | 第60-61页 |
| ·单抗的稳定性测定 | 第61-62页 |
| 3 讨论与分析 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 导师简介 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76-77页 |
