| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-21页 |
| 符号说明 | 第21-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-44页 |
| 1 猪链球菌2型研究进展 | 第24-26页 |
| 2 猪链球菌噬菌体的研究进展 | 第26-33页 |
| ·噬菌体SMP的基本特征 | 第27-29页 |
| ·噬菌体SMP的裂解酶 | 第29-33页 |
| 3 穿孔素蛋白的研究进展 | 第33-44页 |
| ·生物学意义 | 第34-35页 |
| ·生物学特性 | 第35-36页 |
| ·抗穿孔素 | 第36-37页 |
| ·研究范例 | 第37-41页 |
| ·双起始基序 | 第37-38页 |
| ·成孔机制 | 第38-41页 |
| ·基于S蛋白的裂菌时间的调控策略 | 第41页 |
| ·问题和展望 | 第41-44页 |
| 第二章 生物信息学分析 | 第44-56页 |
| 摘要 | 第44-45页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·基因分析 | 第45-46页 |
| ·基因定位 | 第45页 |
| ·基本特性分析 | 第45页 |
| ·同源性分析 | 第45页 |
| ·启动子预测 | 第45-46页 |
| ·蛋白质分析 | 第46-47页 |
| ·理化性质分析 | 第46页 |
| ·同源性分析 | 第46页 |
| ·二级结构预测 | 第46页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-53页 |
| ·穿孔素基因预测 | 第47-48页 |
| ·核酸序列分析 | 第48-49页 |
| ·基本特性 | 第48页 |
| ·同源性 | 第48-49页 |
| ·启动子 | 第49页 |
| ·蛋白分析 | 第49-53页 |
| ·理化特性 | 第49-51页 |
| ·同源性 | 第51-52页 |
| ·拓扑结构 | 第52-53页 |
| ·亚细胞定位 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 HolSMP基因在噬菌体感染的猪链球菌中的转录表达 | 第56-75页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-65页 |
| ·菌株与培养基 | 第57页 |
| ·引物与载体 | 第57页 |
| ·噬菌体效价测定 | 第57-58页 |
| ·噬菌体培养 | 第58-59页 |
| ·液体培养法 | 第58页 |
| ·双层琼脂平板培养法 | 第58-59页 |
| ·噬菌体收集与保存 | 第59-60页 |
| ·平板直接洗脱法 | 第59页 |
| ·上层琼脂收集洗脱法 | 第59页 |
| ·噬菌体保存 | 第59-60页 |
| ·细菌计数 | 第60页 |
| ·溶菌酶作用浓度优化 | 第60页 |
| ·猪链球菌SS2-H超声破碎 | 第60-61页 |
| ·噬菌体感染样本的制备 | 第61页 |
| ·HolSMP基因的转录分析 | 第61-63页 |
| ·核酸样本制备 | 第61-62页 |
| ·PCR定性分析 | 第62页 |
| ·qRT-PCR定量分析 | 第62-63页 |
| ·HolSMP基因的表达分析 | 第63-65页 |
| ·膜蛋白样本制备 | 第63页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第63-64页 |
| ·蛋白免疫印迹分析 | 第64-65页 |
| 2 结果 | 第65-72页 |
| ·噬菌体效价与最佳铺板浓度 | 第65页 |
| ·噬菌体悬液制备策略优化 | 第65页 |
| ·溶菌酶处理 | 第65-66页 |
| ·超声破碎效果鉴定 | 第66-68页 |
| ·猪链球菌的噬菌体感染 | 第68页 |
| ·HolSMP基因的转录水平分析 | 第68-71页 |
| ·反转录PCR定性分析 | 第68-69页 |
| ·qRT-PCR定量分析 | 第69-71页 |
| ·HolSMP基因的表达水平分析 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 第四章 HolSMP基因的功能鉴定 | 第75-97页 |
| 摘要 | 第75-76页 |
| 1 材料与方法 | 第76-84页 |
| ·菌株、噬菌体与培养基 | 第76页 |
| ·引物与质粒 | 第76-77页 |
| ·基因克隆 | 第77-78页 |
| ·表达质粒的构建 | 第78-79页 |
| ·pEXH1、pEXL表达质粒的构建 | 第78页 |
| ·pACEXL表达质粒的构建 | 第78页 |
| ·pEX、pACEX对照质粒的构建 | 第78-79页 |
| ·HolSMP基因的表达 | 第79-80页 |
| ·质粒转化 | 第79页 |
| ·IPTG诱导 | 第79-80页 |
| ·蛋白检测 | 第80页 |
| ·HolSMP基因表达对宿主的影响 | 第80-81页 |
| ·细菌生长速度 | 第80页 |
| ·细菌存活率 | 第80-81页 |
| ·菌体形态学观察 | 第81页 |
| ·能量毒素试验 | 第81页 |
| ·HolSMP蛋白的亚细胞定位 | 第81-82页 |
| ·LySMP基因的表达 | 第82-83页 |
| ·质粒转化与蛋白诱导 | 第82页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第82-83页 |
| ·酶谱试验 | 第83页 |
| ·HolSMP和LySMP共表达对宿主的作用 | 第83页 |
| ·噬菌体基因补偿实验 | 第83-84页 |
| ·IPTG诱导浓度的确定 | 第83页 |
| ·噬菌体感染 | 第83-84页 |
| 2 结果 | 第84-93页 |
| ·基因克隆 | 第84页 |
| ·质粒构建与酶切鉴定 | 第84-85页 |
| ·基因诱导表达 | 第85-87页 |
| ·HolSMP基因表达 | 第85-86页 |
| ·LySMP基因表达 | 第86-87页 |
| ·HolSMP基因表达对宿主的影响 | 第87-89页 |
| ·能量毒素实验分析 | 第89-90页 |
| ·HolSMP蛋白的亚细胞定位 | 第90-91页 |
| ·HolSMP和LySMP共表达对宿主的作用 | 第91页 |
| ·HolSMP基因对于穿孔素S基因缺陷型λ噬菌体的基因补偿 | 第91-93页 |
| 3 讨论 | 第93-97页 |
| 第五章 HolSMP基因序列与裂菌表型 | 第97-116页 |
| 摘要 | 第97-99页 |
| 1 材料与方法 | 第99-106页 |
| ·菌株与质粒 | 第99页 |
| ·引物 | 第99-100页 |
| ·质粒构建 | 第100-104页 |
| ·构建携带5'-端截短的HolSMP基因的质粒 | 第100-102页 |
| ·构建携带突变基因HolSMPa43c的质粒 | 第102页 |
| ·构建携带跨膜区编码序列缺失的HolSMP基因的质粒 | 第102页 |
| ·构建携带末端添加组氨酸标签编码序列的HolSMP基因的质粒 | 第102-103页 |
| ·构建含插入组氨酸标签编码序列的HolSMP基因的质粒 | 第103-104页 |
| ·构建p32Hb重组质粒 | 第104页 |
| ·蛋白的胞内生物学作用分析 | 第104页 |
| ·HolSMP抗体制备 | 第104-106页 |
| ·抗原制备 | 第104-105页 |
| ·动物免疫 | 第105页 |
| ·血清分离 | 第105页 |
| ·抗体效价测定 | 第105-106页 |
| 2 结果 | 第106-114页 |
| ·5'-端截短的HolSMP基因与裂菌表型 | 第106-108页 |
| ·基因HolSMPa43c与裂菌表型 | 第108页 |
| ·跨膜区编码序列缺失的HolSMP基因与裂菌表型 | 第108-109页 |
| ·末端添加组氨酸标签编码序列的HolSMP基因与裂菌表型 | 第109-110页 |
| ·插入组氨酸标签编码序列的HolSMP基因与裂菌表型 | 第110-112页 |
| ·HolSMPb蛋白的表达与纯化 | 第112-114页 |
| ·HolSMP多克隆抗体的效价测定与保存 | 第114页 |
| 3 讨论 | 第114-116页 |
| 第六章 HolSMP蛋白表达策略与胞外生物学活性 | 第116-134页 |
| 摘要 | 第116-117页 |
| 1 材料与方法 | 第117-124页 |
| ·菌株与培养基 | 第117页 |
| ·引物与质粒 | 第117-118页 |
| ·质粒构建 | 第118-120页 |
| ·表达系统优化 | 第120-121页 |
| ·原核表达系统 | 第120页 |
| ·真核表达系统 | 第120-121页 |
| ·诱导表达程序优化 | 第121-122页 |
| ·表达程序（一） | 第121页 |
| ·表达程序（二） | 第121-122页 |
| ·HolSMP重组蛋白的表达纯化 | 第122页 |
| ·LySMP重组蛋白的表达纯化 | 第122-123页 |
| ·浊度递减试验 | 第123页 |
| ·HolSMP重组蛋白作用条件的优化 | 第123页 |
| ·裂解细菌试验 | 第123-124页 |
| 2 结果 | 第124-131页 |
| ·诱导表达系统筛选结果 | 第124页 |
| ·诱导表达程序优化结果 | 第124-125页 |
| ·HolSMP139t蛋白的表达和纯化 | 第125页 |
| ·LySMP蛋白的表达、纯化和活性检测 | 第125-128页 |
| ·HolSMP139t蛋白最适作用条件 | 第128-129页 |
| ·HolSMP139t蛋白的裂菌特性 | 第129-131页 |
| 3 讨论 | 第131-134页 |
| 参考文献 | 第134-147页 |
| 全文结论 | 第147-148页 |
| 附录1 实验材料与仪器 | 第148-151页 |
| 附录2 培养基和溶液配方 | 第151-156页 |
| 攻读博士期间发表的文章 | 第156-158页 |
| 致谢 | 第158-160页 |
