| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-32页 |
| ·细胞程序性死亡 | 第14页 |
| ·细胞程序性死亡的类型 | 第14-15页 |
| ·Caspase 调控动物 PCD 过程 | 第15-17页 |
| ·植物中可检测到 caspase-like 活性 | 第17-19页 |
| ·植物已鉴定的 caspase-like 蛋白酶 | 第19-29页 |
| ·Subtilases | 第19-22页 |
| ·Metacaspases | 第22-23页 |
| ·Legumains (VPEs) | 第23-29页 |
| ·镉胁迫对植物生长发育的影响 | 第29-30页 |
| ·本研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-56页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第32页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32-33页 |
| ·实验引物 | 第33页 |
| ·软件和网络资源 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-56页 |
| ·RNA 提取 | 第34-35页 |
| ·RNA 的纯化 | 第35-36页 |
| ·反转录 cDNA 第一条链的合成 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌 DH5α 感受态的制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第37-38页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第39页 |
| ·序列测定 | 第39-40页 |
| ·DNA 提取 | 第40-41页 |
| ·目的基因 cDNA 全长的获得 | 第41-42页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第42页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第42-43页 |
| ·染色体步移 | 第43-45页 |
| ·甲基化检测 | 第45页 |
| ·原核表达 | 第45-47页 |
| ·根癌农杆菌介导的植物转化 | 第47-50页 |
| ·拟南芥的无土栽培、转化及分析 | 第50-52页 |
| ·生理生化指标测定 | 第52-53页 |
| ·Clustal X 的使用 | 第53页 |
| ·MEGA 5.0 构建系统发生树 | 第53-54页 |
| ·苹果 caspase-like 蛋白家族成员的鉴定 | 第54页 |
| ·MhVPEγ 基因的序列分析 | 第54页 |
| ·MhVPEγ蛋白结构预测及可视化 | 第54-55页 |
| ·蛋白相互作用分析 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-123页 |
| ·苹果 caspase-like 基因家族的全基因组分析 | 第56-86页 |
| ·苹果 subtilases 基因家族的全基因组分析 | 第56-70页 |
| ·苹果 metacaspases 基因家族的全基因组分析 | 第70-78页 |
| ·苹果 legumains 基因家族的全基因组分析 | 第78-86页 |
| ·平邑甜茶 MhVPEγ 基因的分离及功能鉴定 | 第86-110页 |
| ·平邑甜茶 MhVPEγ 基因的分离 | 第86页 |
| ·平邑甜茶 MhVPEγ 基因的序列分析 | 第86-88页 |
| ·MhVPEγ 多重序列比对和系统发生分析 | 第88-91页 |
| ·MhVPEγ 和 hcaspase-1 的结构比较 | 第91-92页 |
| ·MhVPEγ 的结构分析 | 第92-94页 |
| ·MhVPEγ 基因 5’侧翼序列的分离与分析 | 第94-97页 |
| ·MhVPEγ 基因的表达分析 | 第97-102页 |
| ·MhVPEγ 基因的原核表达分析 | 第102-103页 |
| ·MhVPEγ 参与水杨酸缓解镉胁迫对平邑甜茶幼苗伤害的过程 | 第103-110页 |
| ·MhVPEγ 基因在拟南芥中的转化 | 第110-117页 |
| ·转基因表达载体的构建 | 第110-113页 |
| ·转基因拟南芥的筛选及鉴定 | 第113-117页 |
| ·MhVPEγ 在转基因拟南芥中的功能鉴定 | 第117-123页 |
| ·转基因拟南芥的表型分析 | 第117-119页 |
| ·转基因拟南芥对镉胁迫的响应 | 第119-123页 |
| 4 讨论 | 第123-129页 |
| ·苹果中存在 caspase-like 蛋白酶 | 第123-125页 |
| ·平邑甜茶 MhVPEγ 基因的功能分析 | 第125-129页 |
| ·MhVPEγ 的结构分析 | 第125-126页 |
| ·逆境胁迫和信号物质对 MhVPEγ 基因的表达调控 | 第126-127页 |
| ·抑制 VPEγ 基因的表达可以增强转基因拟南芥对镉胁迫的抗性 | 第127-129页 |
| 5 结论 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-143页 |
| 附录 | 第143-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 攻读学位期间发表和完成论文 | 第147页 |
