| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-38页 |
| ·课题的学术背景及其理论与实际意义 | 第16-17页 |
| ·国内外文献综述 | 第17-36页 |
| ·微生物农药的研究概况 | 第17-19页 |
| ·毛壳菌的研究概况 | 第19-25页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第25-27页 |
| ·表达序列标签研究进展 | 第27-31页 |
| ·生物信息学与ESTs序列分析 | 第31-33页 |
| ·微生物几丁质酶的研究概况 | 第33-35页 |
| ·酿酒酵母表达研究概况 | 第35-36页 |
| ·目前角毛壳菌研究中存在的问题 | 第36-37页 |
| ·课题来源及主要研究内容 | 第37-38页 |
| ·课题来源 | 第37页 |
| ·主要研究内容 | 第37-38页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第38-61页 |
| ·实验材料 | 第38-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·酶和试剂 | 第40-44页 |
| ·仪器设备 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-61页 |
| ·角毛壳菌的培养 | 第45页 |
| ·角毛壳菌产几丁质酶的研究 | 第45页 |
| ·角毛壳菌两个菌丝体cDNA文库的构建 | 第45-49页 |
| ·角毛壳菌表达序列标签测定 | 第49-52页 |
| ·ESTs序列的生物信息学分析 | 第52-53页 |
| ·角毛壳菌两条几丁质酶基因的表达类型鉴定 | 第53-54页 |
| ·内切几丁质酶基因Chi46 的克隆 | 第54-57页 |
| ·几丁质酶基因Chi46 在酿酒酵母中的表达 | 第57-60页 |
| ·转化子几丁质酶诱导表达及发酵条件的优化 | 第60-61页 |
| 第3章 C1文库和C2 文库的构建及质量鉴定 | 第61-74页 |
| ·角毛壳菌产几丁质酶的研究 | 第61-62页 |
| ·角毛壳菌两个菌丝体 cDNA 文库的构建 | 第62-67页 |
| ·总RNA的分离提取 | 第62页 |
| ·mRNA的提取纯化 | 第62-64页 |
| ·cDNA双链的合成 | 第64-65页 |
| ·cDNA片断的胶回收及和载体的连接 | 第65-66页 |
| ·cDNA文库的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·cDNA 文库的质量鉴定 | 第67-68页 |
| ·角毛壳菌cDNA文库构建和质量鉴定的讨论 | 第68-73页 |
| ·总RNA的提取纯化 | 第68-69页 |
| ·构建cDNA文库取材时间的选择 | 第69-70页 |
| ·cDNA文库构建中逆转录酶的选择 | 第70-71页 |
| ·构建 cDNA 文库中 cDNA 片断和载体的选择原则 | 第71页 |
| ·检测cDNA文库插入片断长度方法的选择 | 第71-72页 |
| ·cDNA文库质量的评估 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第4章 角毛壳菌基因表达谱的建立 | 第74-95页 |
| ·C1 文库的大规模ESTs测序分析 | 第74-83页 |
| ·C1 文库的大规模ESTs测序结果 | 第74-75页 |
| ·C1 文库ESTs序列的长度分析 | 第75页 |
| ·C1 文库ESTs序列的聚类分析 | 第75-78页 |
| ·C1 文库中基因表达谱的分析 | 第78页 |
| ·C1 文库中ESTs序列的GO分类 | 第78-81页 |
| ·C1 文库获得的可能与生物防治相关的基因 | 第81-83页 |
| ·C2 文库的大规模ESTs测序分析 | 第83-89页 |
| ·C2 文库的ESTs测序结果 | 第83-84页 |
| ·C2 文库ESTs序列的聚类分析 | 第84-86页 |
| ·C2 文库中基因表达谱分析 | 第86页 |
| ·C2 文库的ESTs序列GO分类 | 第86-88页 |
| ·诱导条件下获得的可能与生物防治相关的基因 | 第88-89页 |
| ·ESTs序列在网上的公布与提交 | 第89-90页 |
| ·角毛壳菌ESTs序列分析和生物防治机制的讨论 | 第90-94页 |
| ·ESTs序列测定和生物信息学分析 | 第90-91页 |
| ·关于角毛壳菌生物防治机制的探讨 | 第91-94页 |
| ·本章小结 | 第94-95页 |
| 第5章 C1 文库和 C2 文库的比较分析 | 第95-115页 |
| ·两个cDNA文库单一基因的比较 | 第95-96页 |
| ·两个cDNA文库基因表达丰度差异 | 第96-98页 |
| ·两个cDNA文库GO功能分类比较 | 第98-101页 |
| ·两个cDNA文库代谢途径的差异比较 | 第101-105页 |
| ·两个cDNA文库生物防治相关基因比较 | 第105-106页 |
| ·角毛壳菌两条几丁质酶基因的比较分析 | 第106-108页 |
| ·两条几丁质酶基因的生物信息学比较 | 第106-107页 |
| ·两条几丁质酶表达类型的RT-PCR鉴定 | 第107-108页 |
| ·角毛壳菌两个cDNA文库比较的分析 | 第108-114页 |
| ·高表达基因的比较分析 | 第108-109页 |
| ·代谢途径的比较分析 | 第109-110页 |
| ·生物防治相关基因的差异分析 | 第110-111页 |
| ·两条几丁质酶基因表达的分析 | 第111-112页 |
| ·关于几丁质酶代谢调控的讨论 | 第112-113页 |
| ·差减cDNA文库和一般cDNA文库的比较 | 第113-114页 |
| ·本章小结 | 第114-115页 |
| 第6章 角毛壳菌几丁质酶基因的克隆及表达 | 第115-130页 |
| ·内切几丁质酶基因序列的克隆 | 第115-117页 |
| ·内切几丁质酶基因Chi46 保守区分析 | 第117-118页 |
| ·几丁质酶基因Chi46 的酿酒酵母转化表达 | 第118-121页 |
| ·几丁质酶基因Chi46 的扩增及与pYES2 载体的连接 | 第118-119页 |
| ·几丁质酶基因Chi46 的酿酒酵母转化和鉴定 | 第119-121页 |
| ·转化子产几丁质酶发酵条件的优化 | 第121-124页 |
| ·培养时间对转化子产几丁质酶的影响 | 第121-122页 |
| ·半乳糖浓度对转化子产几丁质酶的影响 | 第122页 |
| ·几丁质浓度对转化子产几丁质酶的影响 | 第122-123页 |
| ·诱导培养基的起始pH值对转化子产几丁质酶的影响 | 第123-124页 |
| ·Chi46 基因克隆和在酿酒酵母中表达的讨论 | 第124-129页 |
| ·几丁质酶基因Chi46 的扩增 | 第124-125页 |
| ·几丁质酶基因Chi46 在酿酒酵母中的表达 | 第125-128页 |
| ·转化子发酵条件优化的研究 | 第128-129页 |
| ·本章小结 | 第129-130页 |
| 结论 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-146页 |
| 附录 | 第146-179页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第179-181页 |
| 致谢 | 第181-182页 |
| 个人简历 | 第182页 |