根癌农杆菌介导的ACS反义基因转化中国水仙研究
| 缩写词 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-29页 |
| 1 农杆菌介导的单子叶植物遗传转化研究进展 | 第15-18页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化机理及特点 | 第15页 |
| ·影响农杆菌转化单子叶植物的因素 | 第15-18页 |
| ·农杆菌特性 | 第16页 |
| ·单子叶植物 | 第16-18页 |
| 2 水仙花生物技术研究进展 | 第18-24页 |
| ·离体植株再生 | 第18-22页 |
| ·直接器官发生途径 | 第19-20页 |
| ·间接器官发生途径 | 第20-22页 |
| ·体细胞胚发生途径 | 第22页 |
| ·相关基因克隆 | 第22页 |
| ·遗传转化 | 第22-23页 |
| ·水仙花生物技术的应用 | 第23-24页 |
| ·存在的问题及展望 | 第24页 |
| 3 ACS基因研究进展 | 第24-26页 |
| ·ACS基因的生物学功能 | 第24页 |
| ·ACS基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·ACS基因在植物遗传转化中的应用 | 第25-26页 |
| 4 反义RNA在观赏植物基因工程中的若干应用 | 第26-28页 |
| ·反义RNA在基因功能研究中的应用 | 第27页 |
| ·反义RNA在花色修饰和延缓衰老中的应用 | 第27-28页 |
| ·反义RNA在雄性不育资源研究中的应用 | 第28页 |
| 5 本研究的内容与意义 | 第28-29页 |
| ·研究内容 | 第28页 |
| ·研究意义 | 第28-29页 |
| 第二章 中国水仙高频离体再生途径的选择 | 第29-35页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-30页 |
| ·鳞茎预处理及消毒 | 第29页 |
| ·不同外植体的获得 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·培养条件 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-33页 |
| ·中国水仙鳞茎消毒方法的筛选 | 第30-31页 |
| ·中国水仙不同外植体直接诱导小鳞茎 | 第31页 |
| ·中国水仙不同外植体诱导愈伤组织 | 第31-32页 |
| ·中国水仙不同外植体来源的愈伤组织诱导小鳞茎再生 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| ·中国水仙鳞茎较适消毒方法的改进 | 第33页 |
| ·中国水仙高频离体再生途径及其接种时期的选择 | 第33-34页 |
| ·植物生长调节剂是中国水仙高频离体再生的关键 | 第34-35页 |
| 第三章 中国水仙转基因受体系统的建立及优化 | 第35-51页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·试剂、根癌农杆菌菌株及载体 | 第35-36页 |
| ·受体材料 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·不同受体材料小鳞茎高频再生稳定性验证 | 第36页 |
| ·根癌农杆菌的继代保存 | 第36页 |
| ·不同受体材料对根癌农杆菌的敏感性 | 第36页 |
| ·受体系统对抗生素的耐受性 | 第36页 |
| ·受体系统的优化 | 第36-37页 |
| ·GUS组织化学法检测 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-48页 |
| ·不同受体材料小鳞茎高频再生稳定性验证 | 第38-39页 |
| ·不同受体材料对根癌农杆菌的敏感性 | 第39页 |
| ·受体系统对卡那霉素的耐受性 | 第39-41页 |
| ·受体系统对头孢霉素的耐受性 | 第41-42页 |
| ·受体系统的优化 | 第42-48页 |
| ·再生鳞茎小切块受体系统的优化 | 第42-45页 |
| ·愈伤组织受体系统的优化 | 第45-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·中国水仙遗传转化受体系统再生途径的两栖性 | 第48-49页 |
| ·中国水仙两种遗传转化受体系统特点比较 | 第49-50页 |
| ·再生频率和转化效率是受体系统优化的重点 | 第50-51页 |
| 第四章 农杆菌介导的ACS反义基因转化中国水仙 | 第51-65页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·农杆菌对头孢霉素的耐性验证 | 第51页 |
| ·农杆菌浸染受体材料 | 第51-52页 |
| ·共培养 | 第52页 |
| ·除菌 | 第52页 |
| ·农杆菌介导转化中国水仙主要影响因子研究 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-61页 |
| ·农杆菌LBA4404对头孢霉素的耐性验证 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导中国水仙遗传转化主要影响因子 | 第54-61页 |
| ·受体材料预培养对GUS瞬时表达的影响 | 第54页 |
| ·受体材料前处理对GUS瞬时表达的影响 | 第54-55页 |
| ·农杆菌重悬液浓度对GUS瞬时表达的影响 | 第55-56页 |
| ·农杆菌稀释液对GUS瞬时表达的影响 | 第56页 |
| ·农杆菌重悬液中蔗糖浓度对GUS瞬时表达的影响 | 第56-57页 |
| ·农杆菌浸染液对GUS瞬时表达的影响 | 第57页 |
| ·浸染时间对GUS瞬时表达的影响 | 第57-58页 |
| ·农杆菌活化物对GUS瞬时表达的影响 | 第58-59页 |
| ·共培养时间的选择 | 第59页 |
| ·共培养温度对GUS瞬时表达的影响 | 第59-60页 |
| ·共培养培养基pH值对GUS瞬时表达的影响 | 第60-61页 |
| ·不同受体系统对GUS瞬时表达的影响 | 第61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| ·农杆菌介导的中国水仙转化环节新策略 | 第61页 |
| ·中国水仙不同受体系统遗传操作技术参数的异同 | 第61-62页 |
| ·预培养与前处理在遗传转化中的意义 | 第62页 |
| ·遗传转化中共培养的作用机理 | 第62-63页 |
| ·农杆菌介导的单子叶植物遗传转化效果 | 第63-65页 |
| 第五章 抗性小鳞茎的筛选、植株再生及检测 | 第65-76页 |
| 1 材料与方法 | 第65-70页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·植物材料 | 第65页 |
| ·试验设备 | 第65-66页 |
| ·试验试剂 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-70页 |
| ·抗性小鳞茎的筛选培养 | 第66页 |
| ·抗性小鳞茎的继代增殖 | 第66页 |
| ·抗性小鳞茎的膨大、生根及再生植株移栽 | 第66页 |
| ·再生植株的GUS组织化学法检测 | 第66-67页 |
| ·农杆菌质粒DNA的提取 | 第67-68页 |
| ·CTAB法提取中国水仙总DNA | 第68-69页 |
| ·gus基因的PCR检测 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·筛选方式对抗性小鳞茎筛选效果的影响 | 第70-71页 |
| ·筛选抗性小鳞茎的动态过程以及正常抗性系的获得 | 第71-72页 |
| ·中国水仙转基因小鳞茎植株再生及转基因植株移栽 | 第72页 |
| ·转基因植株叶片组织化学法检测 | 第72页 |
| ·转基因植株叶片PCR检测 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-76页 |
| ·抗性小鳞茎筛选过程中的再生频率问题 | 第73页 |
| ·筛选方式与阳性率的关系问题 | 第73-74页 |
| ·遗传转化过程中的基因沉默现象 | 第74页 |
| ·转基因的效率问题 | 第74-76页 |
| 第六章 小结 | 第76-80页 |
| 1 中国水仙高频离体再生途径的选择 | 第76页 |
| 2 中国水仙转基因受体系统的建立及优化 | 第76-77页 |
| 3 农杆菌介导的ACS反义基因转化中国水仙 | 第77-78页 |
| 4 抗性小鳞茎的筛选、植株再生及检测 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 附录 图版及其说明 | 第92-102页 |
| 在学期间发表论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
