| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-19页 |
| 1 猪圆环病毒（PCV）国内外研究现状 | 第10-17页 |
| ·病毒的分类、形态和结构 | 第10页 |
| ·基因组特点 | 第10-12页 |
| ·主要ORFs 及其编码蛋白 | 第12-13页 |
| ·Rep 蛋白 | 第12-13页 |
| ·Cap 蛋白 | 第13页 |
| ·PCV2 的宿主细胞及其对淋巴细胞的影响 | 第13-15页 |
| ·PCV 的靶细胞 | 第13-14页 |
| ·PCV 对淋巴细胞和细胞因子的影响 | 第14-15页 |
| ·与PCV2 有关疾病 | 第15-16页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合症 | 第15页 |
| ·猪皮炎肾病综合征 | 第15-16页 |
| ·繁殖障碍 | 第16页 |
| ·A2 型先天性震颤 | 第16页 |
| ·猪呼吸道病复合征 | 第16页 |
| ·猪增生性和坏死性肺炎 | 第16页 |
| ·感染性核酸的研究进展 | 第16-17页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第17页 |
| 3 研究的内容和方法 | 第17-19页 |
| 第二章 猪圆环病毒Ⅱ型 DT 株的分离鉴定及动物感染实验 | 第19-26页 |
| 1 材料与方法 | 第19-21页 |
| ·病料、主要试剂、质粒、菌种、细胞 | 第19-20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·病料基因组的提取 | 第20页 |
| ·病料中PCV 病毒的 PCR 检测 | 第20页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 PCV2 | 第20页 |
| ·PCV2 病毒的分离及其基因组提取 | 第20-21页 |
| ·PCV2 全基因组的扩增、克隆与酶切鉴定 | 第21页 |
| ·测序鉴定及序列分析 | 第21页 |
| ·PMWS 动物模型的建立 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-24页 |
| ·病料中PCV 的 PCR 检测 | 第21页 |
| ·病料中PCV2 的间接免疫荧光鉴定 | 第21页 |
| ·PCV2 全长基因的克隆及阳性重组载体的构建 | 第21-22页 |
| ·序列同源性分析 | 第22-24页 |
| ·PCV2-DT 株与世界其他地区 PCV2 分离株序列的同源性分析 | 第22-23页 |
| ·PCV2-DT 株与我国不同地区 PCV2 分离株序列同源性分析 | 第23-24页 |
| ·PMWS 动物模型的建立 | 第24页 |
| 3 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 Rep、 Cap 启动子定位及 Rep 启动子上vISRE 功能分析 | 第26-36页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·细胞、病毒、质粒、菌种和主要试剂 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·圆环病毒Ⅱ东台株和圆环病毒Ⅰ基因组的提取 | 第28页 |
| ·各预测启动子片断 P1、P2、P3、P4、P5、Pm 的扩增及回收 | 第28页 |
| ·将各扩增片段定向克隆于载体pGL3-Basic 中 | 第28页 |
| ·宿主菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接产物转化 | 第28-29页 |
| ·小量碱裂解法提取质粒 | 第29页 |
| ·所提质粒的双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒、对照质粒的制备 | 第29-30页 |
| ·重组质粒瞬时转染 PK-15 细胞 | 第30页 |
| ·α-IFN 对 PCV Rep 启动子的影响 | 第30页 |
| ·虫荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性分析 | 第30-31页 |
| 2 结果 | 第31-34页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的XhoⅠ和HindⅢ双酶切鉴定结果 | 第32页 |
| ·启动子活性测定结果 | 第32-33页 |
| ·PCV1 和 PCV2 Rep 启动子用α-IFN 处理后，活性变化情况 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 PCV2 及 HA- Tag PCV2 感染性克隆的构建 | 第36-46页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·细胞、病毒、质粒、菌种 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·圆环病毒Ⅱ东台株（PCV2-DT）基因组的提取 | 第38页 |
| ·含单拷贝 PCV2 全长基因重组载体pSK-PCV2 的构建与鉴定 | 第38页 |
| ·含双拷贝 PCV2 长基因重组载体pSK-2PCV2 的构建与鉴定 | 第38页 |
| ·含 HA-Tag 重组质粒pSK-PCV2-HA1 的构建 | 第38-39页 |
| ·含 HA-Tag 标签重组质粒pSK-PCV2-HA2 的构建与鉴定 | 第39页 |
| ·阳性质粒pSK-PCV2、pSK-2PCV2、pSK-PCV2-HA2 的大量制备 | 第39页 |
| ·含 HA-Tag 标签 PCV2 环型基因（Circo-DNA-HA）制备 | 第39页 |
| ·pSK-PCV2、pSK-2PCV2 和 Circo-DNA-HA 分别瞬时转染 PK-15 细胞 | 第39页 |
| ·被转染细胞总 RNA 的提取 | 第39页 |
| ·被转染细胞的 RT-PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| ·质粒pSK-PCV2、pSK-2PCV2 转染细胞的 IFA 鉴定 | 第40页 |
| ·Circo-DNA-HA 染细胞的 IPMA 鉴定 | 第40页 |
| ·HA-Tag 稳定性鉴定 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-44页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第40-42页 |
| ·PCV2 全长基因的扩增结果 | 第40页 |
| ·基因片段 XholⅠS-PHA 和 PHS-PEcoRⅤA 的扩增结果 | 第40页 |
| ·含 HA-Tag 标签 XholⅠS-PEcoRⅤA 基因片段的扩增结果 | 第40-41页 |
| ·含 HA 标签的 PCV2 全长基因的扩增结果 | 第41-42页 |
| ·各重组质粒的酶切鉴定结果 | 第42页 |
| ·重组质粒pSK-PCV2 的酶切鉴定结果 | 第42页 |
| ·重组质粒pSK-2PCV2 的酶切鉴定结果 | 第42页 |
| ·质粒pSK-PCV2-HA1 的 NcoⅠ酶切鉴定结果 | 第42页 |
| ·pSK-PCV2-HA2 的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·PSK-PCV2、PSK-2PCV2、Circo-DNA-HA 转染 PK-15 细胞的RT-PCR 检测结果 | 第42页 |
| ·PSK-2PCV2 转染 PK-15 后 PCV2 病毒的 IFA 鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·Circo-DNA-HA 转染细胞的 IPMA 鉴定结果 | 第43页 |
| ·PCV2-HA 病毒中标签 HA 稳定性检测结果 | 第43-44页 |
| ·血凝试验结果 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录1:质粒 PSK-2PCV2、PSK-PCV2-HA2 的构建示意图 | 第54-56页 |
| 附录2:缩写词英汉对照表 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 导师简介 | 第58-59页 |
