| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-37页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎及其危害 | 第14-15页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌(APP) | 第15-23页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现 | 第15页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的基本特征 | 第15-17页 |
| ·毒力相关因子 | 第17-23页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的检测和诊断方法 | 第23-28页 |
| ·乳胶凝集试验(LAT) | 第24页 |
| ·琼脂扩散试验(GDT) | 第24-25页 |
| ·补体结合试验(CFT) | 第25页 |
| ·间接血凝试验(IHA) | 第25-26页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第26-27页 |
| ·凝集试验 | 第27页 |
| ·环状沉淀实验(RPT) | 第27页 |
| ·间接荧光抗体试验(IFAT) | 第27-28页 |
| ·APP突变株构建方法的研究进展 | 第28-33页 |
| ·自然突变 | 第29页 |
| ·人工化学诱变 | 第29页 |
| ·转座子突变技术 | 第29-30页 |
| ·同源重组技术 | 第30-33页 |
| ·细菌二元调控系统(TCS)的研究现状 | 第33-37页 |
| ·二元调控系统的基本结构与作用机理 | 第33-34页 |
| ·细菌二元调控系统的主要功能 | 第34-35页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌中的二元调控系统 | 第35-37页 |
| 第二章 胸膜肺炎放线杆菌tbpB基因的克隆表达与间接ELISA方法的建立 | 第37-56页 |
| ·研究的目的意义 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第38-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·血清 | 第38页 |
| ·主要酶以及试剂盒来源 | 第38-39页 |
| ·培养基、抗生素配制 | 第39页 |
| ·寡核甘酸引物 | 第39页 |
| ·使用溶液及储存液 | 第39-41页 |
| ·实验方法 | 第41-47页 |
| ·表达载体的构建方法 | 第41-43页 |
| ·表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44页 |
| ·TbpB蛋白的制备 | 第44-45页 |
| ·Western-blot | 第45-46页 |
| ·蛋白质浓度的测定(BAC分析) | 第46页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌抗原的制备 | 第46页 |
| ·间接ELISA最佳抗原包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·TbpB-ELISA临界值的确定 | 第47页 |
| ·TbpB-ELISA特异性和敏感性实验 | 第47页 |
| ·TbpB的生物信息学分析 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-54页 |
| ·tbpB基因的克隆、原核表达、包涵体的提取 | 第47-49页 |
| ·Western-blot分析 | 第49页 |
| ·BAC法测定重组蛋白浓度 | 第49页 |
| ·间接ELISA抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第49-50页 |
| ·TbpB-ELISA临界值的确定 | 第50-51页 |
| ·TbpB-ELISA特异性和敏感性实验 | 第51页 |
| ·TbpB蛋白的生物信息学分析 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 胸膜肺炎放线杆菌zmp基因的研究 | 第56-83页 |
| ·研究的目的意义 | 第56-57页 |
| ·试验材料 | 第57-62页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第57-59页 |
| ·主要溶液的配制 | 第59-60页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第60-61页 |
| ·酶、抗生素及试剂盒 | 第61页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-70页 |
| ·细菌的复苏、增殖及基因组的提取 | 第62页 |
| ·PCR产物和酶切产物的回收与纯化 | 第62页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第62页 |
| ·APP电转化感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| ·连接产物的转化 | 第63页 |
| ·质粒的制备 | 第63-64页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第64页 |
| ·zmp基因在BL21中的诱导表达 | 第64页 |
| ·SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第64-65页 |
| ·zmp基因编码蛋白的活性测定 | 第65页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的PCR鉴定 | 第65页 |
| ·细菌RNA提取 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR | 第66页 |
| ·zmp基因全基因及前后臂片段的克隆与鉴定 | 第66-67页 |
| ·自杀性质粒pEMΔZMP的构建与zmp基因缺失菌株的筛选 | 第67-68页 |
| ·pSKALZ诱导型同源重组载体的构建、突变株的筛选与分析 | 第68-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-81页 |
| ·zmp基因的克隆表达与重组蛋白活性分析 | 第70-72页 |
| ·重组自杀性质粒PEMΔZMP的构建与突变株筛选 | 第72-76页 |
| ·pSKALZ诱导型同源重组载体的构建、突变株筛选及分析 | 第76-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 胸膜肺炎放线杆菌ArcA-ArcB二元调控系统的研究 | 第83-95页 |
| ·研究目的与意义 | 第83-84页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·菌株和质粒 | 第84页 |
| ·寡核甘酸引物 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-89页 |
| ·细菌的增殖 | 第85页 |
| ·细菌PCR模板制备 | 第85-86页 |
| ·PCR扩增 | 第86页 |
| ·限制性酶切 | 第86页 |
| ·从凝胶中回收目的片段 | 第86-87页 |
| ·DNA片断的连接 | 第87页 |
| ·感受态的制备及转化 | 第87页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA | 第87-88页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌电转感受态细胞的制备及转化 | 第88页 |
| ·接合转移与胸膜肺炎放线杆菌双基因缺失株的构建 | 第88-89页 |
| ·结果分析 | 第89-94页 |
| ·重组自杀质粒pEMOCAUD的构建 | 第89-91页 |
| ·重组自杀质粒pEMOCBUD的构建 | 第91-94页 |
| ·讨论 | 第94-95页 |
| 小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
