| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-20页 |
| 1 引言 | 第20-46页 |
| ·植物的耐盐性 | 第20-34页 |
| ·盐胁迫对植物的危害 | 第20-22页 |
| ·膜损伤 | 第21页 |
| ·光合下降、能耗增加 | 第21-22页 |
| ·营养亏缺(养分离子吸收不平衡) | 第22页 |
| ·植物的盐胁迫适应机制 | 第22-26页 |
| ·解毒作用 | 第23页 |
| ·维持体内离子和渗透平衡 | 第23-26页 |
| ·生长调节 | 第26页 |
| ·盐胁迫信号途径 | 第26-30页 |
| ·Ca~(2+)偶联的CDPK 信号途径 | 第27页 |
| ·Ca~(2+)偶联的SOS 信号途径 | 第27-29页 |
| ·MAPK 磷酸化蛋白传递途径 | 第29-30页 |
| ·棉花的耐盐性 | 第30-34页 |
| ·棉花耐盐性的遗传基础 | 第32页 |
| ·提高棉花耐盐性的途径 | 第32-34页 |
| ·植物的抗病性 | 第34-37页 |
| ·植物的真菌病害及植物抗真菌病害基因工程的策略 | 第34页 |
| ·在植物与病原识别水平上调控而激活植物的抗病机制 | 第34-35页 |
| ·植物抗真菌基因 | 第34-35页 |
| ·病原菌无毒基因的利用 | 第35页 |
| ·导入植物防卫反应基因增强植物抗病性 | 第35-36页 |
| ·利用抗真菌的蛋白质 | 第35-36页 |
| ·植保素 | 第36页 |
| ·增强细胞壁强度 | 第36页 |
| ·导入降解或抑制病原菌致病因子的基因使植物抗病 | 第36-37页 |
| ·致病毒素的降解 | 第36页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGIP） | 第36页 |
| ·核糖体失活蛋白 | 第36-37页 |
| ·锌指蛋白研究进展 | 第37-44页 |
| ·锌指蛋白的结构 | 第37-38页 |
| ·锌指蛋白分类 | 第38-39页 |
| ·锌指蛋白的作用方式 | 第39-40页 |
| ·识别DNA | 第39页 |
| ·识别RNA | 第39-40页 |
| ·蛋白之间的相互作用 | 第40页 |
| ·与逆境胁迫相关的植物锌指蛋白 | 第40-43页 |
| ·与盐胁迫有关的锌指蛋白 | 第41页 |
| ·与冷胁迫有关的锌指蛋白 | 第41-42页 |
| ·与干旱胁迫有关的锌指蛋白 | 第42页 |
| ·与氧胁迫有关的锌指蛋白 | 第42-43页 |
| ·强光胁迫下有关的锌指蛋白 | 第43页 |
| ·CCCH 型锌指蛋白的研究进展 | 第43-44页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第44-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-76页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·植物材料 | 第46页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第46页 |
| ·载体和菌株 | 第46-47页 |
| ·实验引物 | 第47页 |
| ·其它材料 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-76页 |
| ·棉花盐胁迫诱导cDNA 文库的构建与筛选 | 第48-55页 |
| ·RNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·RNA 纯化 | 第49-50页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第50页 |
| ·双链DNA 的合成 | 第50页 |
| ·蛋白酶K 消化dscDNA | 第50-51页 |
| ·SfiI 消化dscDNA | 第51页 |
| ·双链文库DNA 的纯化 | 第51-52页 |
| ·cDNA 与λTriplEx2 载体连接 | 第52页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 的包装 | 第52页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 原始文库的效价测定 | 第52-53页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 文库的扩增 | 第53页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 扩增文库的效价测定 | 第53-54页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 的筛选 | 第54-55页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 转化pTriplEx2 | 第55页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第55页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备及转化 | 第55-56页 |
| ·序列测定 | 第56页 |
| ·3’RACE 法获得3’端序列 | 第56页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第56-57页 |
| ·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第57页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第57-58页 |
| ·碱法小量质粒DNA 的提取 | 第58页 |
| ·Northern 杂交 | 第58-60页 |
| ·RNA 提取及电泳 | 第58-59页 |
| ·转膜及烘膜 | 第59页 |
| ·探针合成 | 第59页 |
| ·预杂交及杂交 | 第59-60页 |
| ·Southern 杂交 | 第60-61页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第60页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第60页 |
| ·转膜 | 第60-61页 |
| ·探针合成 | 第61页 |
| ·预杂交及杂交 | 第61页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第61-63页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备及转化 | 第62页 |
| ·农杆菌的培养 | 第62页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第62-63页 |
| ·转基因烟草植株的鉴定、耐盐性及抗病性实验 | 第63-65页 |
| ·转基因烟草植株的鉴定 | 第63页 |
| ·转基因烟草耐盐性实验 | 第63-64页 |
| ·生理指标的测定 | 第64页 |
| ·转基因烟草的抗病性实验 | 第64-65页 |
| ·GhZFP1-GFP 融合蛋白表达载体转化洋葱表皮细胞 | 第65页 |
| ·GhZFP1-GFP 融合蛋白表达载体构建 | 第65页 |
| ·GhZFP1-GFP 融合蛋白表达载体转化洋葱表皮细胞 | 第65页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第65-68页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第65页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第65-66页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第66页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第66-67页 |
| ·考马斯亮蓝G-250 法测定蛋白质含量 | 第67页 |
| ·抗体的制备 | 第67-68页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第68页 |
| ·酵母双杂交文库的构建及筛选 | 第68-75页 |
| ·构建 pGBKT7-GhZFP1(m1-m7)诱饵蛋白表达载体 | 第68-69页 |
| ·乙酸锂法制备并转化酵母感受态细胞 | 第69-70页 |
| ·诱饵蛋白自激活活性检测 | 第70页 |
| ·诱饵蛋白毒性的验证 | 第70页 |
| ·构建酵母双杂交文库RNA 提取及mRNA 的分离 | 第70-71页 |
| ·用Oligo（dT）引物合成cDNA 第一链 | 第71页 |
| ·LD-PCR 合成双链cDNA | 第71-72页 |
| ·用BD CHROMA SPIN? TE-400 柱子进行双链cDNA 的纯化 | 第72页 |
| ·共转化法构建酵母双杂交文库 | 第72-73页 |
| ·酵母双杂交文库的筛选 | 第73-74页 |
| ·阳性克隆相互作用特异性的体内重新鉴定 | 第74页 |
| ·阳性克隆β-半乳糖苷酶活性检测 | 第74-75页 |
| ·细胞核定位的瞬时表达试验 | 第75-76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-99页 |
| ·盐胁迫诱导棉花幼苗叶片cDNA 文库的构建及筛选 | 第76-78页 |
| ·棉花幼苗叶片RNA 的提取 | 第76页 |
| ·文库构建及效价测定 | 第76-77页 |
| ·盐胁迫诱导棉花cDNA 文库的筛选 | 第77-78页 |
| ·棉花锌指蛋白基因GhZFP1 的序列及功能分析 | 第78-89页 |
| ·GhZFP1 全长cDNA 的分离 | 第78页 |
| ·GhZFP1 的序列分析 | 第78-83页 |
| ·GhZFP1-GFP 融合蛋白的亚细胞定位 | 第83页 |
| ·棉花GhZFP1 基因的表达分析 | 第83-85页 |
| ·棉花GhZFP1 基因的功能分析 | 第85-89页 |
| ·棉花GhZFP1 基因在烟草中超表达及转基因烟草鉴定 | 第85页 |
| ·转基因烟草的耐盐性分析 | 第85-87页 |
| ·转基因烟草的抗病性分析 | 第87-88页 |
| ·GhZFP1 的原核诱导表达和抗体制备 | 第88-89页 |
| ·酵母双杂交文库的构建及筛选 | 第89-99页 |
| ·诱饵蛋白表达载体的构建及序列测定 | 第89-90页 |
| ·诱饵蛋白的自激活活性鉴定 | 第90-91页 |
| ·诱饵蛋白对酵母细胞的生长没有影响 | 第91页 |
| ·酵母双杂交cDNA 文库的构建 | 第91页 |
| ·酵母双杂交cDNA 文库的筛选 | 第91-96页 |
| ·利用营养标记和蓝白斑对文库进行初步筛选 | 第91-92页 |
| ·利用PCR 对阳性克隆文库进行二次筛选 | 第92-93页 |
| ·阳性克隆结合活性的重新验证及假阳性克隆的排除 | 第93-94页 |
| ·阳性克隆序列分析 | 第94-96页 |
| ·棉花GZIRD21A 和GZIPR5 基因的表达分析 | 第96-97页 |
| ·GhZFP1 与GZIRD21A 和GZIPR5 相互作用结构域的鉴定 | 第97-99页 |
| 4 讨论 | 第99-108页 |
| ·棉花CCCH 型锌指蛋白GhZFP1 与植物抗逆性 | 第99-100页 |
| ·GhZFP1 通过与GZIRD21A 和GZIPR5 的相互作用介导了植物的抗逆性 | 第100-101页 |
| ·GhZFP1 可能编码一种在细胞核和细胞质之间穿梭的蛋白 | 第101-102页 |
| ·GhZFP1 可能的作用机制 | 第102-104页 |
| ·SRZFP 家族与生物和非生物胁迫 | 第104-105页 |
| ·酵母双杂交和原核表达实验中常见难题及对策 | 第105-108页 |
| 5 结论 | 第108-110页 |
| 6 参考文献 | 第110-126页 |
| 7 附录 | 第126-133页 |
| 入学以来已发表或待发表的论文及成果 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
