| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 抗菌肽的性质与功能研究进展 | 第9-24页 |
| 前言 | 第9页 |
| 1. 抗菌肽与免疫防线 | 第9-11页 |
| 2. 抗菌肽基因及其家族 | 第11-13页 |
| 3. 抗菌肽表达异常与疾病 | 第13页 |
| 4. 抗菌肽的理化特性与分类 | 第13-14页 |
| 5. 抗菌肽的抗微生物活性 | 第14-15页 |
| 6. 抗菌肽对癌细胞的杀伤作用 | 第15页 |
| 7. 抗菌肽与精子成熟 | 第15页 |
| 8. 抗菌肽的信号分子作用 | 第15-16页 |
| 9. 抗菌肽的表达和调控 | 第16-17页 |
| 10. 抗菌肽基因的的发现与表达纯化 | 第17-18页 |
| 前景与展望 | 第18-19页 |
| 参考文献 | 第19-24页 |
| 第二章BIN18抗菌活性及其在抗细菌性附睾炎中的作用研究 | 第24-61页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 材料与方法 | 第25-33页 |
| 1. 质粒和菌株 | 第25页 |
| 2. 工具酶 | 第25页 |
| 3. 主要生化试剂 | 第25页 |
| 4. 质粒的构建 | 第25-27页 |
| 1) 用于在C057 细胞中表达Bi1116的表达载体构建 | 第25-26页 |
| 2) 用于mBi1116转基因小鼠载体pmE-mBi1116HA的构 | 第26页 |
| 3) pcH54/mE-mBi1116HA载体的构建 | 第26页 |
| 4) pBS-U6/mBi1116载体的构建 | 第26-27页 |
| 5) pMD18-T/actin质粒的构建 | 第27页 |
| 5. DNA的制备 | 第27页 |
| 6. COS7细胞的转染 | 第27页 |
| 7. 显微注射与受精卵移植 | 第27-28页 |
| 8. 小鼠尾巴基因组DNA的抽提 | 第28页 |
| 9. 转基因小鼠的PCR鉴定 | 第28页 |
| 10. RNA 抽提 | 第28页 |
| 11. CDNA的反转录 | 第28-29页 |
| 12. RT-PCR反应 | 第29页 |
| 13. REAL-TIME RT-PCR | 第29页 |
| 14. 蛋白的抽提 | 第29页 |
| 15. 蛋白质浓度的测定 | 第29-30页 |
| 16. 蛋白电泳 | 第30页 |
| 17. 蛋白印迹（WESTERN BLOT） | 第30-31页 |
| 18. 组织切片及免疫组化分析 | 第31-32页 |
| 19. 抗菌分析实验 | 第32页 |
| 20. 小鼠生育能力实验 | 第32页 |
| 21. 精子浓度及运动情况检测实验（CASA） | 第32-33页 |
| 22. 小鼠输精管大肠杆菌逆流注射致附睾炎实验 | 第33页 |
| 23. 数据的统计分析 | 第33页 |
| 实验结果 | 第33-55页 |
| 1. MBIN1B体外抗菌活性研究 | 第33-38页 |
| 1) 用于COS7 细胞表达的mBin1b 表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2) mBin1b RNA干扰载体pBS-U6/mBin1b的构 | 第34-35页 |
| 3) mBin1b的COS7 细胞瞬时转染和对大肠杆菌的抗性分析 | 第35-36页 |
| 4) mBin1b 对白色葡萄球菌的抗性分析 | 第36-37页 |
| 5) mBin1b抗菌活性的盐离子浓度敏感性 | 第37-38页 |
| 2. MBIN1B过表达转基因小鼠的研究 | 第38-55页 |
| 1) mBin1b过表达转基因小鼠载体的构建 | 第38-40页 |
| 2) 转基因小鼠的的PCR鉴定和传代建系 | 第40-41页 |
| 3) 转基因小鼠的RNA表达水平的检测 | 第41-44页 |
| 4) 转基因小鼠蛋白表达水平的检测 | 第44-46页 |
| 5) 免疫组化 | 第46-47页 |
| 6) 转基因小鼠的生育能力实验 | 第47-48页 |
| 7) 小鼠附睾炎模型的建立 | 第48-49页 |
| 8) 转基因小鼠附睾与野生型小鼠附睾抗大肠杆菌能力的比较 | 第49-55页 |
| ⅰ抗菌实验 | 第49-50页 |
| ⅱ小鼠附睾外观比较 | 第50-51页 |
| ⅲ附睾病理组织切片 | 第51-52页 |
| ⅳ精子运动及浓度的测定 | 第52-54页 |
| ⅴ不同浓度梯度大肠杆菌的体内抗菌实验 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 第三章 MBD-12、MBD-37 抗菌肽体外抗菌活性的研究 | 第61-77页 |
| 引言 | 第61-62页 |
| 材料与方法 | 第62-67页 |
| 1. 质粒和菌株 | 第62页 |
| 2. 工具酶 | 第62页 |
| 3. 主要生化试剂 | 第62页 |
| 4. COS7细胞PCDNA3 表达载体的构建 | 第62页 |
| 5. 毕赤酵母PPIC-9 表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 6. 细胞转染用DNA的制备 | 第63页 |
| 7. COS7 细胞的转染 | 第63-64页 |
| 8. 酵母表达用培养基的配制 | 第64页 |
| 9. 毕赤酵母GS115 电转化感受态细胞的制备和转化 | 第64-65页 |
| 10. 酵母转化子的PCR鉴定 | 第65页 |
| 11. 抗菌肽在酵母中的诱导表达 | 第65-66页 |
| 12. 组织RNA的抽提 | 第66页 |
| 13. CDNA的反转录 | 第66页 |
| 14. RT-PCR反应 | 第66页 |
| 15. 抗菌分析实验 | 第66-67页 |
| 16. 数据的统计分析 | 第67页 |
| 实验结果 | 第67-73页 |
| 1. MBD-12、MBD-37 在小鼠中的表达 | 第67页 |
| 2. PCDNA3-MBD12、PCDNA3-MBD37 表达载体的构建 | 第67-68页 |
| 3. 毕赤酵母PPIC9 表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 4. MBD-12/37 COS7 细胞转染上清的抗菌活性实验 | 第69-70页 |
| 5. MBD-12/37 毕赤酵母表达上清的抗菌活性分析 | 第70-72页 |
| 1) 抗大肠杆菌活性分析 | 第70-71页 |
| 2) 抗金黄色葡萄球菌活性分析 | 第71-72页 |
| 6. mBD-12, mBD-37 抗菌活性的盐离子浓度敏感性实验 | 第72-73页 |
| 讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 第四章 四环素诱导的激活型条件性RNA干扰系统的建立 | 第77-96页 |
| 引言 | 第77-78页 |
| 材料与方法 | 第78-84页 |
| 1. 载体的构建 | 第78-83页 |
| 1) 小鼠U6 启动子载体的构建 | 第78-79页 |
| 2) TRE-U6 重组载体的构建 | 第79页 |
| 3) 重组转录激活蛋白载体的构建 | 第79-80页 |
| 4) shRNAs序列的克隆 | 第80-82页 |
| 5) mBin1bHA表达载体的构建 | 第82-83页 |
| 2. 细胞的培养和转染 | 第83页 |
| 3. 蛋白质印迹（WESTERN BLOT） | 第83页 |
| 4. REAL-TIME RT-PCR | 第83-84页 |
| 5. 抑菌实验 | 第84页 |
| 6. 数据的统计分析 | 第84页 |
| 实验结果 | 第84-91页 |
| 1. RTETOCT转录激活型条件性RNAI系统的建立 | 第84-86页 |
| 2. 四环素诱导的条件性RNAI对细胞中内源性基因和外源性基因的抑制 | 第86-89页 |
| 3. SHRNAS在非诱导状态下的漏表达 | 第89页 |
| 4. 条件性RNAI系统的诱导药物剂量依赖性和诱导时间依赖性 | 第89-91页 |
| 讨论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 发表文章及参编书目 | 第99-100页 |
