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马铃薯花青素转录激活基因的克隆与序列分析

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-8页
1 前言第8-25页
   ·花青素概述第8-9页
   ·影响花色素苷表现的内在因素第9-10页
     ·花色素苷的结构第9页
     ·细胞的 PH 值第9-10页
     ·共色作用第10页
     ·金属络合物的影响第10页
     ·花瓣细胞形状第10页
     ·外界环境影响第10页
   ·花色素合成途径及相关研究第10-16页
     ·花色素的生物合成途径第10-12页
     ·花色素生物合成的遗传和生物化学第12页
     ·花色素生物合成所需的结构基因第12-16页
       ·查尔酮合成酶(CHS)第12-13页
       ·查尔酮异构酶(CH I)第13页
   1 3.3.3 黄烷酮3 一羟化酶(F3H)第13-14页
   1 3.3.4 类黄酮3’羟化酶(F3’H)第14页
   1 3.3.5 类黄酮3’5’羟化酶(F3’5’H)第14页
   1 3.3.6 黄烷酮醇还原酶(DFR)第14-15页
   1 3.3.7 花色素合成酶(ANS)第15页
   1 3.3.8 花色素苷糖基转移酶(3GT)第15-16页
   1 3.3.9 花色素苷甲基转移酶(AMT)第16页
   1 3.3.10 其它结构基因第16页
   ·花色素生物合成所需的调节基因第16-23页
     ·花色素生物合成所需的转录因子的分类与结构特点第16-19页
     ·花色素苷转录调节因子的调控机制第19-23页
       ·苯丙氨酸代谢途径和其类黄酮分支途径的调节第19-22页
       ·利用转录因子修饰类黄酮的代谢第22-23页
   ·花色素合成调控机制的假说第23-24页
   ·本研究的目的和意义第24页
   ·本研究的技术路线第24-25页
2 材料与方法第25-40页
   ·材料与试剂第25页
     ·材料第25页
     ·菌种第25页
     ·试剂第25页
     ·仪器设备第25页
   ·紫色马铃薯MYC、MYB 基因的克隆第25-27页
     ·紫色马铃薯紫皮 RNA 勺提取第25-27页
     ·RNA 电泳检测第27页
   ·引物的设计第27-28页
     ·克隆马铃薯MYC 基因的引物设计第27-28页
       ·保守区的引物设计第27页
       ·cDNA 片段末端扩增引物的设计第27-28页
     ·马铃薯MYB 基因的引物设计第28页
       ·马铃薯MYB 保守区引物设计第28页
   ·PCR 反应体系的建立第28-32页
     ·马铃薯MYC 基因片段PCR 扩增体系的建立第28-31页
       ·马铃薯 MYC 基因保守区域的克隆第28-29页
       ·电泳(196的琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的纯度和浓度)第29页
       ·紫色马铃薯 MYC 基因 3'端的 PCR 扩增体系第29-31页
     ·马铃薯 MYB 基因片段 PCR 扩增体系的建立第31-32页
       ·马铃薯 MYB 基因保守区域片段的 PCR 反应体系第31-32页
   ·目的基因的克隆与测序第32-37页
     ·目的片段的回收(DNA 琼脂糖凝胶回收试剂盒购自TIANGEN)第32-33页
     ·目的片段与 T 载体的连接第33页
     ·大肠杆菌感受态的制备第33页
     ·大肠杆菌感受态的检测和转化方法第33-34页
     ·小量提取质粒(《分子克隆实验指南》2002)第34-35页
     ·大量提取质粒第35-36页
     ·聚乙二醇沉淀法纯化质粒 DNA第36-37页
     ·重组子的酶切鉴定第37页
     ·重组子的保存及测序第37页
     ·测序第37页
   ·核酸序列分析第37-38页
     ·基于 Blastn 软件的核酸同源性分析第37-38页
     ·cDNA 序列开放阅读框分析第38页
   ·蛋白质功能预测第38-40页
     ·基于 Blastx 软件的蛋白质同源性分析第38页
     ·蛋白质的结构功能域分析第38页
     ·蛋白质序列之间的多重比对及分子进化分析第38-40页
3 结果与分析第40-57页
   ·紫色马铃薯 MYC 基因的克隆第40-51页
     ·MYC 基因保守区域的克隆第40页
     ·测序结果及序列分析第40-42页
       ·测序结果第40-41页
       ·基于 Blastn 软件的核酸同源序列分析第41-42页
     ·马铃薯 MYC 基因cDNA 片段3’端的克隆第42-44页
       ·测序结果第42-43页
       ·基于 BIastn 软件的核酸同源序列分析第43-44页
     ·马铃薯 MYC 基因阅读框架分析第44-46页
       ·Stmy(:基冈全长阅读框架分析第44-46页
     ·蛋白质功能预测第46-48页
       ·基于 Blastx 软件的蛋白质同源性分析第46-47页
       ·蛋白质的结构功能域分析第47-48页
       ·蛋白质功能预测第48页
     ·蛋白质序列之间的多重比对及分子进化分析第48-51页
       ·蛋白质序列之间的多重对齐第48-50页
       ·分子进化分析第50-51页
   ·紫色马铃薯MYB 基因的克隆第51-57页
     ·马铃薯 MYB 基因保守区域的克隆第51-52页
     ·测序结果及序列分析第52-57页
       ·测序结果第52-53页
       ·序列分析第53页
       ·马铃薯Stmy621 1 片段编码保守区域蛋白的分子进化树第53-54页
       ·蛋白质的结构功能域分析第54-55页
       ·序列分析第55页
       ·马铃薯 Stmy6280 片段编码保守区域蛋白的分子进化树第55-56页
       ·蛋白质的结构功能域分析第56-57页
4 讨论第57-58页
5 结论第58-59页
6 参考文献第59-67页
7 致谢第67页

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