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复制缺陷型腺病毒载体Ad-5 HI-环改造平台构建及其在基因治疗头颈癌中的应用

内容提要第1-7页
第一章 前言第7-18页
   ·腺病毒简介第7-11页
     ·腺病毒的分子生物学第7-9页
     ·腺病毒生活周期第9-10页
     ·腺病毒的细胞转化作用第10-11页
   ·基因治疗简介第11-12页
     ·基因治疗载体第11-12页
     ·腺病毒作为基因治疗载体第12页
   ·本论文设计的构思第12-18页
     ·腺病毒纤维蛋白(fiber)结构第13-14页
     ·腺病毒纤维蛋白头节区(knob)结构第14-15页
     ·腺病毒HI-loop 中插入外源基因的可行性第15页
     ·实验思路第15-16页
     ·主要技术路线和方案第16-18页
第二章 实验材料和方法第18-30页
   ·材料、仪器和试剂第18-21页
     ·材料第18-19页
     ·主要仪器第19-20页
     ·常用试剂配置第20-21页
   ·实验方法第21-30页
     ·质粒的小量提取第21-23页
     ·大肠杆菌E.coli 化学感受态的制备第23页
     ·大肠杆菌E.coli 电转感受态的制备第23-24页
     ·连接产物转化E.coli 电转感受态细胞第24-25页
     ·PCR第25页
     ·突变PCR第25-26页
     ·利用LIPOFECTAMINE 2000 进行转染第26页
     ·重组腺病毒的扩增、纯化及滴度测定第26-28页
     ·重组腺病毒荧光素酶表达的检测第28-30页
第三章 结果与讨论第30-64页
   ·重组腺病毒AD5-LUC 的构建及鉴定第30-43页
     ·质粒pT-SM 质粒的构建及鉴定第30-31页
     ·质粒pT-SM-KBX 的构建及鉴定第31-33页
     ·质粒pT-SX 的构建及鉴定第33-34页
     ·pShuttle 载体的改造第34-42页
     ·重组腺病毒质粒Ad5-luc 的构建与鉴定第42-43页
   ·重组腺病毒AD5-LUC-RGD 的构建及鉴定第43-51页
     ·质粒pT-SM-RGD 的构建及鉴定第44-47页
     ·质粒pT-SX-RGD的构建及鉴定第47-49页
     ·质粒Ad5-luc-RGD 的构建及鉴定第49-51页
   ·重组腺病毒AD5-LUC-RGD-MU 的构建及鉴定第51-54页
     ·质粒pT-SM-RGD-MU 的构建及鉴定第51-52页
     ·质粒pT-SX-RGD-MU 的构建及鉴定第52-53页
     ·质粒Ad5-luc-RGD-MU 的构建及鉴定第53-54页
   ·重组腺病毒AD5-LUC 的扩增、纯化及滴度测定第54-57页
     ·重组腺病毒Ad5-luc 的扩增第54-55页
     ·重组腺病毒Ad5-luc 的纯化和腺病毒特异性鉴定第55-57页
   ·重组腺病毒AD5-LUC-RGD 扩增、纯化及滴度测定第57页
     ·重组腺病毒Ad5-luc-RGD 扩增、纯化第57页
     ·重组腺病毒Ad5-luc-RGD 滴度测定第57页
   ·重组腺病毒AD5-LUC 和AD5-LUC-RGD 感染效果的比较第57-61页
     ·重组腺病毒Ad5-luc 感染Hela 和FaDu 细胞第59页
     ·重组腺病毒Ad5-luc-RGD 感染Hela 和FaDu 细胞第59-60页
     ·重组腺病毒Ad5-luc 和Ad5-luc-RGD 感染效率比较第60-61页
   ·工作小结第61-62页
   ·前景展望第62-64页
参考文献第64-68页
摘要第68-72页
ABSTRACT第72-76页
致谢第76页

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