| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-32页 |
| 第一章 禽流感病毒与禽流感流行的生物学特征 | 第16-25页 |
| 1 禽流感病毒的命名与血清型 | 第16-17页 |
| 2 禽流感病毒的特征 | 第17页 |
| 3 宿主范围与宿主特异性 | 第17-20页 |
| ·流感的自然宿主 | 第17页 |
| ·禽流感的易感宿主 | 第17-18页 |
| ·人感染禽流感 | 第18-19页 |
| ·禽流感病毒宿主特异性及分子基础 | 第19-20页 |
| 4 流感病毒毒力形成与变异的分子基础 | 第20-23页 |
| ·HA切割位点的氨基酸序列对AIV毒力的影响 | 第21-22页 |
| ·HA寡糖侧链对AIV毒力的影响 | 第22页 |
| ·宿主细胞RNA插入对AIV毒力的影响 | 第22页 |
| ·HA切割位点外的点突变及其它内部蛋白对毒力的影响 | 第22-23页 |
| ·蛋白水解酶对AIV毒力的影响 | 第23页 |
| 5 1997-2006年间中国境内H5N1流感病毒的进化 | 第23-24页 |
| 6 季节性变化与流感流行 | 第24-25页 |
| 第二章 流感病毒诊断技术研究进展 | 第25-32页 |
| 1 流感病毒的分离和鉴定 | 第25-26页 |
| ·病毒的分离 | 第25页 |
| ·病毒的鉴定 | 第25-26页 |
| 2 流感的血清学诊断方法 | 第26-29页 |
| ·血凝和血凝抑制试验 | 第26-27页 |
| ·神经氨酸酶抑制试验 | 第27页 |
| ·病毒中和试验 | 第27页 |
| ·琼脂凝胶扩散试验 | 第27-28页 |
| ·免疫荧光法 | 第28页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第28-29页 |
| 3 流感的分子生物学诊断方法 | 第29-31页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第29-30页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第30页 |
| ·NASBA法 | 第30页 |
| ·基因芯片 | 第30-31页 |
| ·M检测法 | 第31页 |
| 4 流感的其他诊断方法 | 第31-32页 |
| 第二部分 研究内容 | 第32-108页 |
| 第一章 2004-2005年中国境内迁徙鸟类的流感病毒流行病学分析 | 第32-41页 |
| 1 材料和方法 | 第33-35页 |
| ·样本收集 | 第33页 |
| ·抗原 | 第33-34页 |
| ·血凝抑制试验(HI) | 第34页 |
| ·病毒分离与鉴定 | 第34-35页 |
| ·抗原性分析 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·迁徙鸟类禽流感病毒血清学调查 | 第35-37页 |
| ·迁徙鸟类禽流感病原分离 | 第37页 |
| ·流行病学,临床症状和主要病变 | 第37-38页 |
| ·A／Bar-headed Goose／Qinghai／0510／05毒株的抗原性分析 | 第38页 |
| 3 讨论与小结 | 第38-41页 |
| 第二章 A／BAR-HEADED GOOSE／QINGHAI／0510／05毒株基因序列分析 | 第41-57页 |
| 1 材料与方法 | 第42-44页 |
| ·菌株及质粒 | 第42页 |
| ·酶与生化试剂 | 第42页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第42-43页 |
| ·病毒纯化和总RNA的抽提 | 第43页 |
| ·H5N1型禽流感病毒基因组的RT-PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·基因序列分析 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-54页 |
| ·A／Bar-headed Goose／Qinghai／0510／05毒株基因组的扩增 | 第44-45页 |
| ·基因序列 | 第45-52页 |
| ·Bh H5N1禽流感病毒遗传特性分析 | 第52-54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 A／BAR-HEADED GOOSE／QINGHAI／0510／05毒株的致病性与跨种间传播能力的研究 | 第57-69页 |
| 1 材料与方法 | 第58-61页 |
| ·病毒 | 第58页 |
| ·Bh H5N1病毒EID_(50)的测定 | 第58页 |
| ·鸡人工感染实验 | 第58-59页 |
| ·在鸭中的致病性与传播能力研究 | 第59页 |
| ·在鹅中的致病性与传播能力研究 | 第59页 |
| ·小鼠人工感染实验 | 第59-60页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第60页 |
| ·石蜡切片的染色 | 第60页 |
| ·免疫组化 | 第60-61页 |
| ·常用缓冲液 | 第61页 |
| 2 结果 | 第61-64页 |
| ·Bh H5N1流感病毒对鸡的致病性 | 第61页 |
| ·Bh H5N1病毒对鸭的致病性研究 | 第61-62页 |
| ·Bh H5N1病毒对鹅的致病性研究 | 第62-63页 |
| ·Bh H5N1病毒对鼠的致病性研究 | 第63-64页 |
| 3 小结与讨论 | 第64-69页 |
| 第四章 H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白表达与单克隆抗体的制备 | 第69-82页 |
| 1 材料与方法 | 第70-75页 |
| ·病毒及繁殖 | 第70页 |
| ·菌株及质粒 | 第70页 |
| ·酶与生化试剂 | 第70页 |
| ·实验动物 | 第70-71页 |
| ·常用缓冲液 | 第71页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第71页 |
| ·病毒纯化和总RNA的抽提 | 第71页 |
| ·AIV／H5亚型HA基因的克隆 | 第71-72页 |
| ·AIV／H5亚型血凝素基因原核表达构建 | 第72-73页 |
| ·AIV／H5 HA1融合蛋白的表达和检测 | 第73页 |
| ·动物免疫 | 第73-74页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立、筛选及克隆化 | 第74页 |
| ·腹水的制备 | 第74页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第74-75页 |
| ·抗AIV／H5 HA1蛋白单克隆抗体功能鉴定 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-80页 |
| ·AIV／H5 HA基因的扩增 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的克隆及鉴定 | 第76页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第76-78页 |
| ·表达产物的纯化 | 第78页 |
| ·抗AIV／H5 HA1蛋白细胞株的筛选及克隆化 | 第78页 |
| ·抗AIV／H5 HA1单克隆抗体腹水特异性检测 | 第78-79页 |
| ·抗AIV／H5 HA1蛋白单克隆抗体功能鉴定 | 第79-80页 |
| 3 讨论与小结 | 第80-82页 |
| 第五章 酶标兔抗鸭IGG的制备 | 第82-88页 |
| 1 材料与方法 | 第83-85页 |
| ·试剂和实验动物 | 第83页 |
| ·常用缓冲液 | 第83页 |
| ·鸭IgG的制备 | 第83-84页 |
| ·兔抗鸭IgG的制备 | 第84-85页 |
| ·辣根过氧化物酶标记兔抗鸭IgG | 第85页 |
| ·自制酶标抗体的质量检测 | 第85页 |
| 2 结果 | 第85-87页 |
| ·鸭IgG的制备 | 第85页 |
| ·兔抗鸭IgG的制备 | 第85-86页 |
| ·自制酶标抗体的质量检测 | 第86-87页 |
| 3 小结与讨论 | 第87-88页 |
| 第六章 检测鸭H5亚型禽流感抗体的间接ELISA方法建立 | 第88-108页 |
| 1 材料与方法 | 第89-92页 |
| ·血清 | 第89页 |
| ·ELISA抗原 | 第89页 |
| ·HRP标记的兔抗鸭IgG的制备 | 第89页 |
| ·其它试剂与仪器 | 第89页 |
| ·常用缓冲液 | 第89-90页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的建立 | 第90-91页 |
| ·间接ELISA判定标准的确定 | 第91页 |
| ·间接ELISA特异性和敏感性试验 | 第91页 |
| ·鸭血清ELISA效价(ET)的测定 | 第91页 |
| ·同批抗原包被板内重复性试验 | 第91-92页 |
| ·不同批次抗原包被板间重复性试验 | 第92页 |
| ·血清样品检测 | 第92页 |
| ·HI与间接ELISA监测疫苗免疫鸭抗体水平变化规律 | 第92页 |
| 2 结果 | 第92-99页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的建立 | 第92-95页 |
| ·间接ELISA判定标准的确定 | 第95页 |
| ·鸭血清ELISA效价(ET)的测定 | 第95-96页 |
| ·间接ELISA特异性和敏感性试验 | 第96页 |
| ·间接ELISA稳定性和重复性试验 | 第96-97页 |
| ·ELISA与HI抗体检测方法的比较 | 第97-98页 |
| ·HI与间接ELISA监测疫苗免疫鸭抗体水平变化规律 | 第98-99页 |
| 3 小结与讨论 | 第99-108页 |
| 附录A 常用缓冲液及培养基配方 | 第108-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读硕士期间的科研成果 | 第115页 |
