| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-20页 |
| ·乙型肝炎 | 第8-16页 |
| ·乙型肝炎的流行 | 第8-9页 |
| ·乙型肝炎与肝硬化、肝癌的关系 | 第9-11页 |
| ·慢性乙型肝炎的抗病毒治疗 | 第11-12页 |
| ·慢性乙型肝炎治疗性疫苗的发展 | 第12-16页 |
| ·乙肝核心抗原 | 第16-17页 |
| ·热休克蛋白 | 第17-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-26页 |
| ·材料 | 第20-24页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第20页 |
| ·DNA及质粒回收试剂盒 | 第20页 |
| ·ELISA试剂盒 | 第20页 |
| ·细胞及实验动物 | 第20-21页 |
| ·核酸及蛋白分子量标准 | 第21页 |
| ·所有合成的引物 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·其他耗材 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要溶液 | 第24-26页 |
| 第三章 实验步骤 | 第26-41页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26-32页 |
| ·HBcAg基因设计与克隆 | 第26-27页 |
| ·目的基因突变的纠正 | 第27-30页 |
| ·没有终止密码子的HBcAg蛋白基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·带有终止密码子的HBcAg基因表达载体pET28a-HBcAg的构建 | 第32-33页 |
| ·HSPE7Ztag基因表达载体pET28a-HSPE7Ztag的构建 | 第33页 |
| ·HSPHBcAgZtag基因表达载体pET28a-HSPHBcAgZtag的构建 | 第33-34页 |
| ·HBcAg-His6基因表达载体PET28a-HBcAg-His6的构建 | 第34页 |
| ·表达载体转化表达菌株及目的基因的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞 | 第34页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第35页 |
| ·工程菌5L生物反应器培养 | 第35页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第35-38页 |
| ·HSPHBcAgZtag的纯化 | 第35-36页 |
| ·HBcAg-His6的纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白样品HSPHBcAgZtag和HBcAg-His6的Western免疫印迹 | 第37页 |
| ·蛋白的N端氨基酸测序 | 第37-38页 |
| ·用Lowry法测定样品蛋白浓度 | 第38页 |
| ·HSPHBcAgZtag的活性评价 | 第38-41页 |
| ·小鼠体内免疫 | 第38页 |
| ·小鼠抗-HBc血清抗体滴度的测定 | 第38-39页 |
| ·P815细胞的培养 | 第39页 |
| ·T细胞增殖试验 | 第39-40页 |
| ·杀伤性T细胞试验 | 第40-41页 |
| 第四章 实验结果 | 第41-62页 |
| ·基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·带有终止密码子的HBcAg基因的克隆 | 第41页 |
| ·突变的纠正 | 第41-42页 |
| ·没有终止密码子的HBcAg’基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·HSPE7Ztag基因的克隆 | 第43页 |
| ·HBcAg-His6基因的克隆 | 第43页 |
| ·各种表达载体的构建 | 第43-46页 |
| ·HBcAg基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第43-44页 |
| ·HSPE7Ztag基因表达载体pET28a-HSPE7Ztag的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第44-45页 |
| ·HSPHBcAgZtag基因表达载体pET28a-HSPHBcAgZtag的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第45页 |
| ·HBcAg-His基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第45-46页 |
| ·表达载体转化表达菌株及阳性克隆的诱导表达筛选 | 第46-48页 |
| ·pET28a-HBcAg表达载体转化表达菌株及阳性克隆的诱导表达筛选 | 第46页 |
| ·pET28a-HSPHBcAgZtag表达载体转化表达菌株及阳性克隆的诱导表达筛选 | 第46-47页 |
| ·pET28a-HBcAgHis表达载体转化表达菌株及阳性克隆的诱导表达筛选 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第48页 |
| ·工程菌5L生物反应器培养 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第49-55页 |
| ·目的蛋白表达方式的确定 | 第49-51页 |
| ·HSPHBcAgZtag蛋白的饱和硫酸铵沉淀纯化 | 第51-52页 |
| ·HSPHBcAgZtag蛋白样品S柱阳离子交换层析纯化 | 第52页 |
| ·HSPHBcAgZtag蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·HBcAg-His6蛋白的纯化 | 第53页 |
| ·HSPHBcAgZtag蛋白和HBcAg-His6蛋白的Western blot结果： | 第53-54页 |
| ·蛋白的N端氨基酸测序 | 第54-55页 |
| ·HSPHBcAgZtag的活性评价 | 第55-62页 |
| ·小鼠HBcAg抗血清抗体滴度的测定 | 第55-56页 |
| ·T细胞增殖试验 | 第56-58页 |
| ·记忆性T细胞检测 | 第58-61页 |
| ·杀伤性T细胞试验 | 第61-62页 |
| 第五章 讨论 | 第62-66页 |
| 1.关于热休克蛋白保守性及生物学功能的探讨 | 第62-63页 |
| 2.HBcAg作为治疗性疫苗靶抗原 | 第63页 |
| 3.通过PCR方法获得目的基因 | 第63-64页 |
| 4.聚合体目的蛋白的分离纯化 | 第64页 |
| 5.慢性乙肝治疗性疫苗的动物评价实验 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录一 缩略词表 | 第71-72页 |
| 附录二 发表论文 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
