| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 一． 前言 | 第9-18页 |
| 1． HCMV背景简介 | 第9-16页 |
| 1．1 HCMV的病毒学特征 | 第9-12页 |
| 1．2 病毒感染的致病机理 | 第12-13页 |
| 1．3 病毒的复制 | 第13-14页 |
| 1．4 HCMV感染临床症状 | 第14页 |
| 1．5 HCMV的诊断及治疗 | 第14-16页 |
| 2． UL144、UL145基因简介 | 第16-17页 |
| 3． 课题意义 | 第17-18页 |
| 二． 技术路线 | 第18-19页 |
| 三． 实验仪器与材料 | 第19-22页 |
| 1． 主要仪器 | 第19页 |
| 2． 实验材料 | 第19-22页 |
| 2．1 细胞和菌种 | 第19-20页 |
| 2．2 主要试剂 | 第20页 |
| 2．3 其它主要试剂的配方 | 第20-22页 |
| 四． 实验方法 | 第22-35页 |
| 1． HCMV的分离和培养 | 第22页 |
| 1．1 病毒的收集 | 第22页 |
| 1．2 病毒的分离 | 第22页 |
| 1．3 病毒的培养 | 第22页 |
| 2． 病毒DNA的提取 | 第22-23页 |
| 3． HCMV低传代临床分离株鉴定 | 第23-24页 |
| 3．1 引物的设计 | 第23-24页 |
| 3．2 PCR扩增 | 第24页 |
| 4． UL144基因的扩增、克隆 | 第24-28页 |
| 4．1 UL144基因的扩增 | 第24-25页 |
| 4．2 UL144基因的克隆 | 第25-27页 |
| 4．3 UL144克隆质粒测序 | 第27-28页 |
| 5． UL145基因的扩增、克隆 | 第28-29页 |
| 5．1 UL145基因的扩增 | 第28-29页 |
| 5．2 UL145基因的克隆及测序 | 第29页 |
| 6． HCMV总RNA的提取 | 第29页 |
| 7． HCMV RNA的纯化 | 第29-30页 |
| 8． HCMV RNA的鉴定 | 第30-32页 |
| 8．1 鉴定RT-PCR引物设计 | 第30页 |
| 8．2 HCMV mRNA逆转录成cDNA | 第30-31页 |
| 8．3 PCR鉴定HCMV IE基因mRNA | 第31-32页 |
| 9． UL144基因的RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| 10． UL145基因的RT-PCR扩增 | 第33-35页 |
| 五． 结果与分析 | 第35-56页 |
| 1． 病毒的分离与培养 | 第35-36页 |
| 1．1 人胚肺成纤维细胞培养结果 | 第35页 |
| 1．2 感染病毒后人胚肺细胞出现病变效应 | 第35-36页 |
| 2． HCMV的鉴定 | 第36页 |
| 3． PCR扩增UL144、UL145基因 | 第36-38页 |
| 3．1 PCR扩增UL144基因 | 第36-37页 |
| 3．2 PCR扩增UL145基因 | 第37-38页 |
| 4． UL144、UL145基因的克隆 | 第38-40页 |
| 4．1 UL144基因的克隆 | 第38-39页 |
| 4．2 UL145基因的克隆 | 第39-40页 |
| 4．3 UL144、UL145基因克隆结果鉴定 | 第40页 |
| 5． 克隆质粒pMD18-UL144、pMD18-UL145的鉴定 | 第40-42页 |
| 5．1 克隆质粒pMD18-UL144的鉴定 | 第40-41页 |
| 5．2 克隆质粒pMD18-UL145的鉴定 | 第41-42页 |
| 6． HCMV RNA的提取 | 第42-43页 |
| 7． 通过RT-PCR技术鉴定HCMV mRNA的表达 | 第43页 |
| 8． UL144、UL145基因表达的鉴定 | 第43-45页 |
| 8．1 UL144基因表达的鉴定 | 第43-44页 |
| 8．2 UL144基因RT-PCR产物的克隆鉴定 | 第44页 |
| 8．3 UL145基因的表达鉴定 | 第44-45页 |
| 8．4 UL145基因RT-PCR产物的克隆及鉴定 | 第45页 |
| 9． HCMV UL144、UL145基因核苷酸和氨基酸序列分析结果 | 第45-56页 |
| 9．1 核苷酸序列及其编码蛋白氨基酸序列的多态性 | 第45-49页 |
| 9．2 编码蛋白翻译后修饰位点分析结果 | 第49-52页 |
| 9．3 HCMV UL144、UL145编码蛋白质性质预测 | 第52-53页 |
| 9．4 UL144和UL145基因编码蛋白质二级结构和功能预测 | 第53-56页 |
| 六． 讨论 | 第56-60页 |
| 1． 病毒的分离和培养 | 第56页 |
| 2． 病毒的鉴定 | 第56-57页 |
| 3． UL144和UL145基因的PCR扩增 | 第57页 |
| 4． 病毒mRNA的检测 | 第57-58页 |
| 5． UL144和UL145基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第58-59页 |
| 6． UL145开放阅读框编码产物分析 | 第59-60页 |
| 七． 小结 | 第60-61页 |
| 八． 附录 | 第61-67页 |
| 附录1 GeneBank公布的UL144基因全序列 | 第61-62页 |
| 附录2 GeneBank公布的UL145基因全序列 | 第62-63页 |
| 附录3 UL144基因全长测序结果(一) | 第63-64页 |
| 附录4 UL144基因全长测序结果(二) | 第64-65页 |
| 附录5 UL145基因全长测序结果(一) | 第65-66页 |
| 附录6 UL145基因全长测序结果(二) | 第66-67页 |
| 九．参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
