摘要 | 第1-8页 |
1.文献综述 | 第8-15页 |
1.1 小麦高分子量谷蛋白亚基研究进展 | 第8-10页 |
1.1.1 小麦高分子量谷蛋白亚基概述 | 第8页 |
1.1.2 小麦高分子量谷蛋白亚基的遗传 | 第8-9页 |
1.1.3 小麦高分子量谷蛋白亚基与烘烤品质的关系 | 第9-10页 |
1.2 HMW—GS(1DX5+1DY10)亚基基因转化小麦的研究进展 | 第10页 |
1.3 载体简介及调控机制 | 第10-11页 |
1.3.1 pRSET-A载体 | 第10-11页 |
1.3.2 调控机制 | 第11页 |
1.4 外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第11-14页 |
1.4.1 启动子(promoter)的选择 | 第11-12页 |
1.4.2 分子伴侣的作用 | 第12-13页 |
1.4.3 二硫键的形成 | 第13页 |
1.4.4 提高活性蛋白表达策略 | 第13-14页 |
1.5 包涵体的产生及复性研究 | 第14-15页 |
2.引言 | 第15-16页 |
3.实验材料与方法 | 第16-24页 |
3.1 菌株与质粒 | 第16页 |
3.2 酶和化学试剂 | 第16页 |
3.3 基因 | 第16页 |
3.4 实验方法 | 第16-24页 |
3.4.1 基因的亚克隆技术 | 第16-19页 |
3.4.2 培养基配制 | 第19页 |
3.4.3 质粒的提取及纯化 | 第19-20页 |
3.4.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第20页 |
3.4.5 菌体的培养 | 第20-21页 |
3.4.6 蛋白质提取及煮样 | 第21页 |
3.4.7 表达组分分析 | 第21页 |
3.4.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第21-23页 |
3.4.9 发酵条件的优化 | 第23-24页 |
4.结果与分析 | 第24-38页 |
4.1 亚克隆质粒pET-17B载体+SUB5、SUB10目的基因的构建 | 第24-25页 |
4.2 表达载体的构建 | 第25-32页 |
4.3 麦谷蛋白SUB5,SUB10基因在大肠杆菌中的克隆及融合表达 | 第32页 |
4.4 发酵条件的优化 | 第32-38页 |
5.结论与讨论 | 第38-40页 |
5.1 结论 | 第38页 |
5.2 讨论 | 第38-40页 |
5.2.1 培养条件对外源基因表达的影响 | 第38-39页 |
5.2.2 目的蛋白可溶组分的纯化和包涵体的纯化 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-44页 |
英文摘要 | 第44-45页 |
附录 | 第45-46页 |
测序结果:SUB10 | 第45-46页 |
测序结果:SUB5 | 第46页 |