| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-13页 |
| 一. 前言及文献综述 | 第13-39页 |
| 1 香蕉保鲜的重要意义 | 第13页 |
| 2 香蕉保鲜的分子生物学研究简述 | 第13-14页 |
| 3 拟南芥的生物学特性 | 第14-15页 |
| 4 乙烯在植物中的信号转导 | 第15-25页 |
| ·乙烯的生物合成及相关研究 | 第15-16页 |
| ·乙烯受体蛋白 | 第16-20页 |
| ·ETR1蛋白 | 第17-18页 |
| ·铜离子参与乙烯受体复合体的形成 | 第18-19页 |
| ·乙烯与ETR1蛋白的相互作用 | 第19-20页 |
| ·乙烯的跨胞质信号转导途径 | 第20-25页 |
| ·乙烯信号转导途径中其他元件相关研究简述 | 第20-22页 |
| ·乙烯信号转导途径模型 | 第22-25页 |
| 5 农杆菌介导的拟南芥Floral dip转化 | 第25-26页 |
| 6 研究基因功能的方法 | 第26-27页 |
| 7 基因沉默的概念及种类 | 第27-28页 |
| 8 RNA干扰研究进展 | 第28-37页 |
| ·RNA干扰现象的发现 | 第28-29页 |
| ·RNA干扰可能的作用机制 | 第29-32页 |
| ·RNA干扰途径中两个重要的酶简述 | 第32-33页 |
| ·依赖于RNA的RNA聚合酶 | 第32-33页 |
| ·Dicer酶 | 第33页 |
| ·RNA干扰的特点 | 第33-35页 |
| ·RNA干扰的实验生物学简述 | 第35-37页 |
| 9 本论文的研究内容和目的意义 | 第37-38页 |
| 10 本实验的技术路线 | 第38-39页 |
| 二. 材料与方法 | 第39-58页 |
| 1 材料和试剂 | 第39页 |
| ·菌种和质 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| 2 方法与步骤 | 第39-58页 |
| ·拟南芥ETR1基因S5I、AI的克隆和测序 | 第39-47页 |
| ·拟南芥野生型材料的种植方法 | 第39-40页 |
| ·拟南芥总DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第41页 |
| ·PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·PCR产物的回收 | 第42-43页 |
| ·回收的AI和S5I片段与pMD18-T Vecter连接 | 第43-44页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第44-45页 |
| ·白色单菌落的质粒小量法提取 | 第45-46页 |
| ·质粒的纯化 | 第46页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的穿刺培养 | 第47页 |
| ·克隆产物的测序及分析 | 第47页 |
| ·表达拟南芥ETR1基因ds RNA的植物表达载体的构建 | 第47-51页 |
| ·ds RNA表达载体的插入片段 | 第47页 |
| ·DNA末端的去磷酸化处理 | 第47-48页 |
| ·把AI片段克隆到pMDT-S5I中建立中间克隆载体pMDT-S5I-AI | 第48-49页 |
| ·构建pCAMBIA1301-S5I-AI植物表达载体 | 第49-50页 |
| ·构建pCAMBIA2301-S5I-AI植物表达载体 | 第50-51页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的构建 | 第51-55页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第51页 |
| ·pCAMBIA2301-S5I-AI直接转化农杆菌GV3101 | 第51-52页 |
| ·含有pCAMBIA2301-S5I-AI质粒的农杆菌工程菌的筛选与鉴定 | 第52-55页 |
| ·农杆菌质粒提取 | 第52-53页 |
| ·探针的制备 | 第53-54页 |
| ·斑点杂交所需试剂的配制 | 第54页 |
| ·杂交 | 第54页 |
| ·洗膜和酶联反应显色检测 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导拟南芥转化 | 第55-56页 |
| ·潜在转化株系的筛选 | 第56页 |
| ·转化植株PCR检测 | 第56-58页 |
| 三. 结果与分析 | 第58-76页 |
| 1 生物信息学分析结果 | 第58-62页 |
| 2 拟南芥ETR1基因S5I、AI的克隆和测序 | 第62-66页 |
| ·拟南芥总DNA的提取 | 第62页 |
| ·PCR扩增AI和S51的DNA片段 | 第62-63页 |
| ·目的片段的回收与克隆及酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·克隆片段的序列测定 | 第64-66页 |
| 3 表达拟南芥ETR1基因ds RNA的植物表达载体的构建 | 第66-73页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301／2301-S5I-AI的构建流程图 | 第66-69页 |
| ·pMDT-AI和pMDT-S5I质粒酶切鉴定目的片段插入方向 | 第69-70页 |
| ·pMDT-S5I-AI质粒酶切鉴定结果 | 第70-71页 |
| ·中间克隆载体pMDT-S5I-AI的测序结果 | 第71-72页 |
| ·pCAMBIA1301／2301-S5I-AI系列表达载体构建和鉴定 | 第72-73页 |
| 4 重组农杆菌工程菌株的构建 | 第73-74页 |
| 5 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第74页 |
| 6 转化植株PCR初步检测 | 第74-76页 |
| 四. 结论 | 第76-77页 |
| 五. 讨论 | 第77-82页 |
| 1 关于E.coli XL1-Blue工程菌株 | 第77页 |
| 2 关于去磷酸化处理 | 第77-79页 |
| 3 关于片段S5I-AI回收问题 | 第79页 |
| 4 关于pMDT-S5I-AI质粒的测序 | 第79-80页 |
| 5 关于dsRNA表达载体插入片段的序列选取 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 附录 | 第90-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
