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猪传染性胸膜肺炎新型基因工程类毒素菌苗的研究

目录第1-7页
中文摘要第7-9页
英文摘要第9-11页
第1章 文献综述第11-39页
   ·猪传染性胸膜肺炎的流行现状及其危害第11-13页
     ·猪传染性胸膜肺炎的流行现状第11-12页
     ·猪传染性胸膜肺炎的危害第12-13页
   ·猪传染性胸膜肺炎的病原学第13-15页
   ·猪传染性胸膜肺炎的流行病学第15-19页
     ·疾病的发生和传播第15-16页
     ·临床症状第16页
     ·病理变化第16-17页
     ·诊断第17-18页
     ·治疗第18页
     ·预防第18-19页
   ·胸膜肺炎放线杆菌的诊断方法研究进展第19-24页
     ·血清学诊断方法第19-23页
     ·病原学诊断方法第23-24页
   ·胸膜肺炎放线杆菌毒力因子研究进展第24-30页
   ·胸膜肺炎疫苗研究进展第30-39页
第2章 胸膜肺炎放线杆菌生长培养基的选择及生长曲线的测定第39-45页
   ·研究目的和意义第39页
   ·材料与方法第39-41页
     ·材料第39-40页
     ·方法第40-41页
       ·细菌的活化第40页
       ·三种培养基生长情况的比较第40-41页
       ·TSB培养基生长曲线的测定第41页
   ·结果与分析第41-43页
   ·讨论第43-44页
   ·小结第44-45页
第3章 胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ的克隆、表达及中间载体pSK-Ⅰ CKA的构建第45-65页
   ·研究目的和意义第45页
   ·材料与方法第45-56页
     ·材料第45-49页
     ·方法第49-56页
       ·细菌的增殖及基因组的提取第49-50页
       ·apx Ⅰ CA及apx Ⅰ A片段的扩增第50页
       ·apx Ⅰ XC、Kan及apx Ⅰ DA片段的扩增第50页
       ·PCR产物的电泳检测第50页
       ·PCR产物的回收与纯化第50-51页
       ·PCR产物的克隆第51页
       ·感受态细胞的制备(氯化钙法)第51页
       ·连接产物的转化第51-52页
       ·质粒的提取第52页
       ·重组质粒的酶切鉴定第52-53页
       ·apx Ⅰ CA的测序第53页
       ·中间质粒pSK Ⅰ CKA构建及序列测定第53页
       ·重组表达质粒pET-Ⅰ CA和pET-Ⅰ A的构建第53页
       ·诱导表达第53-55页
       ·表达产物的SDS-PAGE检测和Western-blot分析第55-56页
   ·结果与分析第56-63页
   ·讨论第63-64页
   ·小结第64-65页
第4章 胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ免疫原性的研究第65-71页
   ·研究目的和意义第65页
   ·材料和方法第65-67页
     ·材料第65-66页
     ·方法第66-67页
       ·间接ELISA操作步骤第66页
       ·毒素基因在BL-21中的诱导表达及包涵体的制备第66页
       ·天然Apx Ⅰ的提取第66-67页
       ·毒素Ⅰ溶血活性的测定第67页
       ·疫苗的制备及免疫第67页
       ·10型APP半数致死量(LD_(50))的确定及攻毒剂量第67页
       ·Apx Ⅰ ELISA检测方法的建立及抗体的检测第67页
   ·结果与分析第67-69页
   ·讨论第69-70页
   ·小结第70-71页
第5章 猪传染性胸膜肺炎新型基因工程类毒素菌苗的研究第71-89页
   ·研究目的和意义第71-72页
   ·材料和方法第72-74页
     ·材料第72页
     ·方法第72-74页
       ·三种毒素基因在BL-21中的诱导表达及包涵体的制备第72页
       ·油乳剂类毒素疫苗的制备第72-73页
       ·免疫小鼠类毒素菌苗的制备及免疫第73页
       ·抗体的检测第73页
       ·攻毒剂量的确定第73页
       ·类毒素菌苗的安全性试验第73-74页
       ·类毒素菌苗对仔猪效力的观测第74页
   ·结果与分析第74-84页
   ·讨论第84-86页
   ·小结第86页
   ·结论第86-89页
参考文献第89-105页
缩略词第105-106页
附录第106-108页
致谢第108页

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