| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·低温保存技术概述 | 第11-12页 |
| ·低温下的微尺度生物传热传质问题 | 第11页 |
| ·低温生物保存技术的发展史 | 第11-12页 |
| ·超低温保存方法 | 第12-13页 |
| ·CPA的导入和洗脱 | 第12-13页 |
| ·冷冻和复温 | 第13页 |
| ·慢速冷却超低温保存法 | 第13页 |
| ·玻璃化超低温保存法 | 第13页 |
| ·复温过程 | 第13页 |
| ·冷冻保护剂 | 第13-15页 |
| ·冷冻保护剂的分类 | 第14页 |
| ·渗透性抗冻剂 | 第14页 |
| ·半渗透性抗冻剂 | 第14页 |
| ·渗透性抗冻剂 | 第14页 |
| ·新型的冷冻保护剂:抗冻蛋白 | 第14-15页 |
| ·玻璃化概念 | 第15-18页 |
| ·玻璃化性质 | 第15-16页 |
| ·部分结晶的玻璃化 | 第16页 |
| ·完全整体玻璃化 | 第16-17页 |
| ·反玻璃化现象 | 第17-18页 |
| ·超低温损伤机理及假说 | 第18-19页 |
| ·组织器官的超低温保存 | 第19-21页 |
| ·概述 | 第19-20页 |
| ·骨组织低温保存的意义 | 第20页 |
| ·组织超低温保存面临的问题 | 第20-21页 |
| ·体积大小或尺度增加问题 | 第20-21页 |
| ·组织器官中细胞的异质性问题 | 第21页 |
| ·生物组织骨架与细胞共存问题 | 第21页 |
| ·细胞与组织的观察及其活性检测 | 第21-24页 |
| ·细胞与组织的观察 | 第21-23页 |
| ·相差显微镜观察 | 第22页 |
| ·扫描电子显微镜观察 | 第22页 |
| ·低温显微技术 | 第22-23页 |
| ·细胞与组织的活性检测 | 第23-24页 |
| ·成骨细胞特异性指标检测 | 第24页 |
| ·组织的活性检测 | 第24页 |
| ·渗透压 | 第24-25页 |
| ·小结 | 第25-27页 |
| 第二章 骨组织的获取，培养与特性鉴定 | 第27-38页 |
| ·概述 | 第27页 |
| ·实验装置与材料 | 第27-29页 |
| ·实验装置 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·骨组织的获取 | 第29-31页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·主要实验材料 | 第29页 |
| ·原代培养过程 | 第29-30页 |
| ·传代培养过程 | 第30页 |
| ·成骨细胞的纯化 | 第30-31页 |
| ·骨组织物性参数 | 第31页 |
| ·骨组织的面积 | 第31页 |
| ·骨组织的厚度 | 第31页 |
| ·骨组织内细胞密度 | 第31页 |
| ·骨组织及成骨细胞的特性鉴定 | 第31-36页 |
| ·成骨细胞的特异性检测 | 第31-32页 |
| ·成骨细胞的形态学检测 | 第32-34页 |
| ·苏木精-伊红染色 | 第32-33页 |
| ·培养过程中的检测 | 第33-34页 |
| ·骨组织的形态学检测 | 第34-36页 |
| ·培养过程中的检测 | 第34-35页 |
| ·扫描电子显微镜观测 | 第35-36页 |
| ·植块培养的误差分析 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 实验关键技术的评估 | 第38-49页 |
| ·概述 | 第38-40页 |
| ·交叉检验(crosscheck) | 第38页 |
| ·溶液浓度的测定 | 第38-39页 |
| ·渗透压方法 | 第38-39页 |
| ·核磁共振方法 | 第39页 |
| ·成骨细胞成活率的测定 | 第39-40页 |
| ·台盼兰染色法 | 第39-40页 |
| ·荧光双重标记染色法 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·溶液中DMSO浓度测定方法的交叉检验 | 第40-41页 |
| ·成骨细胞成活率测定方法的交叉检验 | 第41-42页 |
| ·实验结果与讨论 | 第42-48页 |
| ·溶液中DMSO浓度测定方法的交叉检验 | 第42-46页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第42-43页 |
| ·溶液中DMSO浓度测定方法的交叉检验 | 第43-46页 |
| ·成骨细胞成活率测定方法的交叉检验 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 冷冻保护剂导入过程特性及其对细胞活性的影响 | 第49-65页 |
| ·概述 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·渗透压和渗透时间的关系的测定 | 第50-51页 |
| ·细胞成活率和渗透时间的关系 | 第51页 |
| ·导入方案的考察 | 第51-52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-64页 |
| ·CPA浓度和种类的影响 | 第52-59页 |
| ·DMSO浓度对导入过程的影响 | 第52-55页 |
| ·甘油浓度对导入过程的影响 | 第55-57页 |
| ·两种冷冻保护剂的对比 | 第57-59页 |
| ·操作温度对CPA导入过程的影响 | 第59-61页 |
| ·操作温度对渗透平衡时间的影响 | 第59-60页 |
| ·操作温度对组织内细胞成活率的影响 | 第60-61页 |
| ·导入方案与CPA导入过程的关系 | 第61-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第五章 冷冻保护剂洗脱过程特性及其对细胞活性的影响 | 第65-77页 |
| ·概述 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-67页 |
| ·渗透压和洗脱时间的关系的测定 | 第65-66页 |
| ·洗脱方案的考察 | 第66页 |
| ·再培养过程的影响 | 第66-67页 |
| ·实验结果与分析 | 第67-76页 |
| ·CPA浓度和种类对洗脱过程的影响 | 第67-72页 |
| ·DMSO浓度对洗脱过程的影响 | 第67-69页 |
| ·甘油浓度对洗脱过程的影响 | 第69-72页 |
| ·操作温度对CPA洗脱过程的影响 | 第72-73页 |
| ·洗脱方案与CPA洗脱过程的关系 | 第73-75页 |
| ·后期培养对细胞成活率测定的影响 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第六章 成骨细胞的超低温保存 | 第77-97页 |
| ·概述 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| ·冷冻保护剂玻璃化转变温度(凝固点)的测定 | 第77-78页 |
| ·实验设备及材料 | 第77-78页 |
| ·玻璃化转变温度(凝固点)的测定 | 第78页 |
| ·成骨细胞的冷冻实验 | 第78-79页 |
| ·实验结果与讨论 | 第79-95页 |
| ·冷冻保护剂玻璃化转变(凝固)温度的测量结果 | 第79-83页 |
| ·2mol／L的DMSO溶液的凝固温度 | 第79-80页 |
| ·7mol／L的DMSO溶液的玻璃化转变温度 | 第80-83页 |
| ·VS1的玻璃化转变温度 | 第83页 |
| ·成骨细胞的超低温冷冻 | 第83-95页 |
| ·冷冻复温过程中的现象观察与分析 | 第83-91页 |
| ·成骨细胞成活率与降温复温速率的关系 | 第91-95页 |
| ·小结 | 第95-97页 |
| 第七章 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 攻读硕士期间完成和发表的论文 | 第102-104页 |