| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一章 植酸酶phyA基因稀有密码子的改造提高在毕赤酵母中的表达量 | 第15-37页 |
| 摘要 | 第15-16页 |
| 1 引言 | 第16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-29页 |
| 3 结果 | 第29-34页 |
| 3．1 植酸酶phyA~m基因的定点突变及克隆 | 第29-30页 |
| 3．2 酵母表达载体pPIC9k-phyA~m的构建 | 第30页 |
| 3．3 重组质粒pPIC9k-phyA~m与pPIC9k-phyA的电击转化及转化子的筛选 | 第30-32页 |
| 3．4 重组酵母转化子phyA拷贝数的鉴定 | 第32页 |
| 3．5 转化子的诱导表达和酶活测定 | 第32-33页 |
| 3．6 转化子表达产物的SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| 3．7 重组酵母的遗传稳定性 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-37页 |
| 第二章 植酸酶phyA基因F43Y及I354M，L358F定点突变提高植酸酶热稳定性的研究 | 第37-55页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 1 引言 | 第38-39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-42页 |
| 3 结果 | 第42-52页 |
| 3．1 植酸酶phyA~m基因的定点突变及克隆 | 第42-43页 |
| 3．2 突变植酸酶酵母表达载体pPIC9k-phyA~(m-1),pPIC9k-phyA~(m-2)的构建 | 第43-44页 |
| 3．3 重组质粒pPIC9k-phyA~(m-1)，pPIC9k-phyA~(m-2)的电击转化及转化子的筛选 | 第44页 |
| 3．4 突变植酸酶基因phyA~(m-1)，phyA~(m-2)在毕赤巴斯德酵母中的分泌表达 | 第44-45页 |
| 3．5 转化子表达植酸酶的分离纯化 | 第45-46页 |
| 3．6 突变酶的酶学性质 | 第46-49页 |
| 3．7 植酸酶的二级结构预测分析 | 第49页 |
| 3．8 突变植酸酶中心骨架模式 | 第49-50页 |
| 3．9 植酸酶成熟蛋白的三维结构及局部电子云密度分析 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 植酸酶phyA基因结构延伸突变提高酶热稳定性的研究 | 第55-74页 |
| 摘要 | 第55-56页 |
| 1 引言 | 第56页 |
| 2 材料和方法 | 第56-63页 |
| 3 结果 | 第63-71页 |
| 3．1 植酸酶phyA~m基因融合表达片段的克隆 | 第63-64页 |
| 3．2 植酸酶phyA~m基因pET-30b(+)融合表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 3．3 延伸突变植酸酶phyA~e基因pPIC9k表达片段的PCR及克隆 | 第65页 |
| 3．4 植酸酶phyA~e基因酵母表达载体pPIC9k-phyA~e的构建 | 第65-66页 |
| 3．5 重组酵母表达载体pPIC9k-phyA~e的电击转化及转化子的筛选 | 第66页 |
| 3．6 突变植酸酶基因phyA~e在毕赤巴斯德酵母中的分泌表达 | 第66-67页 |
| 3．7 延伸突变重组酵母表达产物的纯化 | 第67页 |
| 3．8 突变酶的酶学性质 | 第67-69页 |
| 3．9 二级结构的预测 | 第69-70页 |
| 3．10 三级结构预测 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 第四章 综述 | 第74-90页 |
| 1 真菌植酸酶phyA等基因的基因工程进展 | 第74-79页 |
| 1．1 在大肠杆菌中的表达 | 第74-75页 |
| 1．2 在真核生物中的表达 | 第75-76页 |
| 1．3 毕赤酵母表达系统 | 第76-79页 |
| 1．3．1 外源基因特性对表达量的影响 | 第76-78页 |
| 1．3．2 植酸酶稀有密码子改造提高在毕赤酵母表达量 | 第78-79页 |
| 2 真菌植酸酶性质及改性研究进展 | 第79-88页 |
| 2．1 真菌植酸酶的酶学特性 | 第79页 |
| 2．2 真菌植酸酶的热稳定性 | 第79-80页 |
| 2．3 酶蛋白热稳定性机制 | 第80-82页 |
| 2．3．1 酶蛋白一级结构与热稳定性 | 第80-81页 |
| 2．3．2 酶蛋白的高级结构与热稳定性 | 第81-82页 |
| 2．4 植酸酶蛋白质工程研究进展 | 第82-88页 |
| 2．4．1 植酸酶改性的策略 | 第82-83页 |
| 2．4．2 饲用植酸酶改性研究进展 | 第83-87页 |
| 2．4．3 DNA Shuffling技术在酶蛋白改性研究中的应用 | 第87-88页 |
| 2．4．4 结构延伸突变在酶蛋白改性研究中的应用 | 第88页 |
| 3 真菌植酸酶结构与功能 | 第88-90页 |
| 3．1 真菌植酸酶的活性中心 | 第88页 |
| 3．2 植酸酶作用底物的机制 | 第88-89页 |
| 3．3 真菌植酸酶的空间结构 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 在读期间发表论文 | 第97页 |
| 声明 | 第97页 |
