| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-28页 |
| ·木薯简介 | 第10-15页 |
| ·木薯的起源分布及经济意义 | 第10页 |
| ·木薯生产中的各种不利因素 | 第10-12页 |
| ·木薯的遗传转化体系 | 第12-13页 |
| ·以分生组织为基础的转化体系 | 第12页 |
| ·以胚性脆性愈伤组织悬浮细胞为基础的转化体系 | 第12页 |
| ·以直接器官发生为基础的转化体系 | 第12页 |
| ·以体细胞胚胎发生为基础的转化体系 | 第12-13页 |
| ·木薯的遗传转化方法 | 第13-15页 |
| ·基因枪轰击转化法 | 第13-14页 |
| ·农杆菌介导法 | 第14-15页 |
| ·花粉管导入法 | 第15页 |
| ·果聚糖及其代谢相关酶简介 | 第15-26页 |
| ·果聚糖类型及广泛分布 | 第15-17页 |
| ·果聚糖代谢相关途径的关键酶及其研究进展 | 第17-20页 |
| ·果聚糖的合成 | 第17-19页 |
| ·果聚糖的降解 | 第19页 |
| ·蔗糖：蔗糖果糖基转移酶1-SST的酶学特性 | 第19-20页 |
| ·果聚糖在植物抗逆中的作用 | 第20-21页 |
| ·果聚糖与植物抗寒性和抗旱性 | 第20页 |
| ·果聚糖与植物抗盐性、抗涝性和抗贫瘠性 | 第20-21页 |
| ·果聚糖与植物耐土壤金属毒害能力 | 第21页 |
| ·果聚糖参与植物抗逆的可能机制 | 第21-24页 |
| ·果聚糖参与渗透调节 | 第21-22页 |
| ·环境胁迫下果聚糖维持膜的稳定性 | 第22-24页 |
| ·环境胁迫下的果聚糖酶 | 第24页 |
| ·提高果聚糖积累的基因工程 | 第24-25页 |
| ·果聚糖应用前景及问题 | 第25-26页 |
| ·培育抗逆性作物的意义 | 第26页 |
| ·本研究的主要内容及技术路线 | 第26-28页 |
| ·本研究主要内容 | 第26-27页 |
| ·本研究技术路线 | 第27-28页 |
| 2 木薯再生体系的建立及其优化 | 第28-39页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·木薯材料 | 第28页 |
| ·主要仪器和设备 | 第28页 |
| ·相关试剂配制及保存 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-30页 |
| ·木薯无菌材料的获得与保存 | 第29页 |
| ·木薯初级体胚的诱导及体胚继代 | 第29页 |
| ·体胚子叶成熟及器官发生 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-39页 |
| ·6-BA对木薯组培苗单芽茎段继代生长的影响 | 第30-32页 |
| ·2,4-D和picloram诱导木薯初级体胚及体胚继代的影响 | 第32-35页 |
| ·体细胞胚子叶成熟时间对木薯子叶器官发生影响 | 第35页 |
| ·AgNO_3对成熟子叶胚器官发生的影响 | 第35-36页 |
| ·木薯体胚循环及植株再生途径 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-39页 |
| 3 木薯转化体系的建立及其优化 | 第39-50页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·根瘤农杆菌及载体 | 第39页 |
| ·受体材料准备 | 第39页 |
| ·主要仪器和设备 见2.1.2 | 第39页 |
| ·相关试剂配制及保存 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·PBI121空载体转化农杆菌 | 第40-42页 |
| ·成熟子叶型体细胞胚卡那霉素选择压预实验 | 第42页 |
| ·根癌农杆菌工程菌液的制备 | 第42页 |
| ·农杆菌侵染木薯成熟子叶块 | 第42-43页 |
| ·结果分析 | 第43-49页 |
| ·成熟子叶型体细胞胚卡那霉素敏感性分析 | 第43-44页 |
| ·AS(乙酰丁香酮)对转化效率的影响 | 第44-45页 |
| ·农杆菌菌液浓度对转化效率的影响 | 第45-46页 |
| ·农杆菌侵染时间对转化效率的影响 | 第46-48页 |
| ·共培养时间对转化效率的影响 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 4 农杆菌介导蔗糖-蔗糖果糖基转移酶基因转化木薯的研究 | 第50-60页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·受体材料 | 第50页 |
| ·根癌农杆菌菌株及载体 | 第50页 |
| ·试剂的配制 | 第50-51页 |
| ·主要仪器和设备 | 第51页 |
| ·培养基添加成分 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·根癌农杆菌工程菌液的制备 | 第51页 |
| ·农杆菌质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌的活化及感受态制备 | 第52页 |
| ·大肠杆菌的活化 | 第52页 |
| ·制备大肠杆菌感受态 | 第52页 |
| ·农杆菌质粒转化大肠杆菌感受态 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌质粒提取及酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第53页 |
| ·质粒的酶切 | 第53-54页 |
| ·芽器官发生选择压预实验 | 第54页 |
| ·农杆菌侵染成熟子叶型体胚过程及抗性筛选后再生方法 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-59页 |
| ·植物表达载体的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·成熟子叶型体细胞胚PPT敏感性分析 | 第55-57页 |
| ·农杆菌介导的木薯转化及木薯植株筛选后再生 | 第57-59页 |
| ·转化效率分析 | 第59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 5 木薯转化植株的分子检测 | 第60-79页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·植物材料 | 第60页 |
| ·试剂药品 | 第60页 |
| ·转基因木薯的PCR引物设计 | 第60页 |
| ·主要仪器和设备 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-71页 |
| ·质粒提取(中科瑞泰普通质粒小提试剂盒) | 第61页 |
| ·木薯基因组DNA的提取 | 第61-62页 |
| ·CTAB小量提取木薯基因组DNA | 第61页 |
| ·CTAB法大量提取木薯DNA | 第61-62页 |
| ·DNA的纯化 | 第62页 |
| ·木薯总RNA小量提取(SDS法) | 第62-63页 |
| ·试剂准备 | 第62页 |
| ·操作步骤 | 第62-63页 |
| ·PCR检测 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR检测 | 第64-66页 |
| ·反转录 | 第64-65页 |
| ·反转录产物PCR | 第65-66页 |
| ·Southern印记杂交检测 | 第66-71页 |
| ·试剂配制 | 第66-67页 |
| ·探针的标记 | 第67页 |
| ·探针浓度测定 | 第67-69页 |
| ·转基因木薯基因组DNA的酶切 | 第69页 |
| ·DNA的电泳与转膜固定 | 第69-70页 |
| ·预杂交与杂交 | 第70页 |
| ·洗膜与免疫检测 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-77页 |
| ·木薯总DNA的提取 | 第71页 |
| ·转1-Sst基因抗性植株PCR检测结果 | 第71-73页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第73-75页 |
| ·Southern印记杂交检测结果 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-79页 |
| 6 结论与研究展望 | 第79-81页 |
| ·研究结论 | 第79-80页 |
| ·研究展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
