| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 文章综述 | 第10-20页 |
| ·国内外研究动态 | 第10-13页 |
| ·油菜种皮颜色的形成中相关色素物质的研究 | 第10-11页 |
| ·油菜种皮颜色的遗传 | 第11页 |
| ·油菜种皮颜色相关基因的研究 | 第11-13页 |
| ·基因克隆方法 | 第13-16页 |
| ·基因克隆的方法 | 第13-15页 |
| ·RACE在植物基因克隆上的技术优点 | 第15-16页 |
| ·RNAi干涉 | 第16-18页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第16-18页 |
| ·转录后基因沉默 | 第16-17页 |
| ·转录水平基因沉默 | 第17页 |
| ·翻译水平上基因沉默 | 第17-18页 |
| ·RNAi在植物中的应用 | 第18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 花色素合成酶基因(ANS)的全长克隆及分析 | 第20-26页 |
| ·材料与试剂 | 第20-23页 |
| ·供试材料 | 第20页 |
| ·油菜种皮总RNA提取方法 | 第20-21页 |
| ·cDNA合成 | 第21页 |
| ·芥菜型油菜ACTIN基因扩增引物 | 第21页 |
| ·芥菜型油菜类黄酮合成基因引物设计 | 第21-22页 |
| ·PCR反应体系和扩增程序 | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23页 |
| ·RNA提取及检测 | 第23页 |
| ·基因表达RT-PCR分析 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-26页 |
| 第三章 芥菜型油菜花色素合成酶基因(ANS)的全长克隆和序列分析 | 第26-37页 |
| ·材料与试剂 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·分子生物学试剂与试剂盒 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-32页 |
| ·紫叶芥种皮总RNA的提取 | 第26页 |
| ·测定所提取RNA的OD_(260)值 | 第26页 |
| ·特异引物设计 | 第26-27页 |
| ·3'RACE获得3'端目的基因片段 | 第27-28页 |
| ·从总RNA获得第一条cDNA | 第27页 |
| ·3'端目的基因片段的扩增 | 第27-28页 |
| ·'端目的基因片段的切胶回收 | 第28-29页 |
| ·'端目的基因片段克隆到pMDT-18上 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·热激法转化大肠杆菌 | 第30页 |
| ·PCR检测及测序 | 第30页 |
| ·5'RACE获得5'端目的基因片段 | 第30-32页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·5'端目的基因片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·5'端目的基因片段的PCR产物回收,连接,转化及测序 | 第32页 |
| ·对获得目的片段进行生物信息学分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-36页 |
| ·BjANS基因序列 | 第32-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 芥菜型油菜ANS基因RNAi载体的构建 | 第37-46页 |
| ·材料与方法 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·载体与质粒 | 第37页 |
| ·分子生物学试剂 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·油菜总DNA的制备 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·napinA启动子的扩增 | 第38页 |
| ·ANS基因干扰片段的扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR产物回收 | 第39页 |
| ·PCR产物的测序和比对 | 第39页 |
| ·干扰载体的构建 | 第39页 |
| ·napinA启动子插入pFGC5941质粒 | 第39页 |
| ·干扰片段反向插入pFGC.napin质粒 | 第39页 |
| ·干扰片段正向插入pN-ANS质粒 | 第39页 |
| ·热激法转化大肠杆菌 | 第39页 |
| ·冻熔法转化根癌农杆菌 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·启动子和目的基因序列克隆与PCR扩增检测结果 | 第41页 |
| ·测序结果比对 | 第41-44页 |
| ·启动子的酶切验证 | 第44页 |
| ·干扰载体的酶切验证 | 第44-45页 |
| ·转化农杆菌质粒PCR检测 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 缩写词 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57页 |
