| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| ·研究背景 | 第8页 |
| ·PAI-1 概述 | 第8-11页 |
| ·PAI-1 的生理学特性 | 第9页 |
| ·PAI-1 的作用 | 第9-10页 |
| ·参与调节体内凝血和纤溶的平衡 | 第9-10页 |
| ·稳定基底膜 | 第10页 |
| ·其它作用 | 第10页 |
| ·PAI-1 与血管类疾病 | 第10页 |
| ·PAI-1 与脑血管疾病 | 第10页 |
| ·PAI-1 与心血管疾病 | 第10页 |
| ·PAI-1 的检测方法 | 第10-11页 |
| ·PAI-1 的活性检测(PAI-1 :A,CSA 法) | 第11页 |
| ·PAI-1 的抗原检测(PAI-1 :Ag,ELISA 法) | 第11页 |
| ·PAI-1 的基因检测(RT-PCR 法) | 第11页 |
| ·立题意义 | 第11-12页 |
| ·研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 血管内皮细胞PAI-1 基因检测方法的建立 | 第13-22页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·主要溶液 | 第14页 |
| ·实验细胞株 | 第14页 |
| ·实验方法 | 第14-16页 |
| ·HMEC-1 细胞的培养 | 第14页 |
| ·总RNA 提取与逆转录反应 | 第14-15页 |
| ·总RNA 提取 | 第14-15页 |
| ·逆转录反应 | 第15页 |
| ·PAI-1 和β-actin 引物设计 | 第15页 |
| ·标准品的准备 | 第15-16页 |
| ·PAI-1 和β-actin 的普通PCR | 第15页 |
| ·PCR 产物的电泳与纯化 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第16页 |
| ·PAI-1 和β-actin 标准曲线的建立 | 第16页 |
| ·灵敏度、特异性、重复性试验 | 第16页 |
| ·统计学方法 | 第16页 |
| ·实验结果 | 第16-20页 |
| ·总RNA 提取结果 | 第16-17页 |
| ·PAI-1 和β-actin 标准品的制备 | 第17-18页 |
| ·PAI-1 和β-actin 的标准曲线 | 第18-19页 |
| ·标准曲线的灵敏性和熔解曲线分析 | 第19-20页 |
| ·重复性实验 | 第20页 |
| ·讨论 | 第20-21页 |
| ·小结 | 第21-22页 |
| 第三章 PAI-1 下调药物的筛选 | 第22-33页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要溶液 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·实验细胞株 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·药物初筛 | 第24-25页 |
| ·HMEC-1 细胞的培养 | 第24页 |
| ·流式细胞仪分析细胞同步化条件 | 第24页 |
| ·中药样品的配制 | 第24-25页 |
| ·药物干预 | 第25页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA）检测t-PA :Ag | 第25页 |
| ·对初筛药物进行PAI-1 指标考察 | 第25-26页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELESA）检测PAI-1:Ag | 第25-26页 |
| ·发色免疫吸附试验(CSA) 检测PAI-1:A | 第26页 |
| ·内皮细胞PAI-1 基因表达的检测 | 第26页 |
| ·统计学方法 | 第26-27页 |
| ·实验结果 | 第27-31页 |
| ·流式细胞仪分析细胞同步化条件 | 第27页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA）检测t-PA :Ag | 第27-28页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第27-28页 |
| ·初筛结果 | 第28页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELESA）检测PAI-1:Ag | 第28-29页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| ·复筛中药对PAI-1:Ag 的影响 | 第29页 |
| ·发色免疫吸附试验(CSA) 检测PAI-1:A | 第29-30页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第29-30页 |
| ·复筛中药对PAI-1:A 的影响 | 第30页 |
| ·内皮细胞PAI-1 基因表达的检测 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第四章 川芎提取物对血管内皮细胞 t-PA 和 PAI-1 的影响 | 第33-39页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·实验细胞株 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·川芎不同提取物的获得 | 第34页 |
| ·HMEC-1 细胞的培养 | 第34页 |
| ·川芎对HMEC-1 细胞的干预 | 第34-35页 |
| ·发色底物法检测细胞上清中t-PA、PAI-1 的活性 | 第35页 |
| ·用酶联免疫吸附法检测细胞上清中t-PA、PAI-1 的抗原含量 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR 检测细胞上清中t-PA、PAI-1 m RNA 表达 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR 检测细胞上清中t-PA mRNA 的方法 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR 检测细胞上清中PAI-1 mRNA 的方法 | 第35页 |
| ·统计学方法 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-38页 |
| ·川芎对HMEC-1 细胞t-PA、PAI-1 活性的影响 | 第35-36页 |
| ·川芎对HMEC-1 细胞t-PA、PAI-1 抗原含量的影响 | 第36页 |
| ·川芎对HMEC-1 细胞t-PA、PAI-1 mRNA 的影响 | 第36-38页 |
| ·川芎对HMEC-1 细胞t-PA mRNA 的影响 | 第36-37页 |
| ·川芎对HMEC-1 细胞PAI-1 m RNA 的影响 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第五章 总结与展望 | 第39-41页 |
| 课题总结 | 第39-40页 |
| 课题展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第44页 |
