| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目次 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1 双生病毒的基因组结构 | 第9-13页 |
| 2 双生病毒对作物的危害 | 第13-15页 |
| 3 双生病毒的检测与鉴定 | 第15-17页 |
| ·血清学鉴定 | 第15页 |
| ·核酸杂交检测 | 第15-16页 |
| ·PCR技术 | 第16页 |
| ·RCA检测双生病毒的优势 | 第16-17页 |
| 4 RNA沉默简介 | 第17-18页 |
| 5 RNA沉默是一种植物固有的抗病毒防卫反应 | 第18-19页 |
| 6 RNA诱导沉默复合体中的关键蛋白 | 第19-23页 |
| 第二章 用滚环扩增技术检测双生病毒 | 第23-31页 |
| 1 材料和方法 | 第24-25页 |
| ·病毒样品的来源 | 第24页 |
| ·病样的总DNA提取 | 第24-25页 |
| ·CTAB法抽提植物总DNA | 第24-25页 |
| ·试剂盒抽提DNA | 第25页 |
| ·滚换复制扩增 | 第25页 |
| ·RCA-RFLP分析 | 第25页 |
| ·序列测定和分析 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| ·用RCA扩增不同方法提取的植物病样DNA | 第25-26页 |
| ·用RCA-RFLP分析单组份双生病毒以及双生病毒/DNA病害复合体 | 第26-27页 |
| ·用RCA-RFLP分析双组份的双生病毒 | 第27-28页 |
| ·用RCA-RFLP分析田间样品 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 本氏烟中AGO基因沉默后对双生病毒侵染的影响 | 第31-46页 |
| 1 材料与方法 | 第31-36页 |
| ·菌株和载体 | 第31页 |
| ·RNA提取(Trizo1法) | 第31-32页 |
| ·RNA的RT-PCR | 第32页 |
| ·电击转化 | 第32-33页 |
| ·CTAB法小量提取基因组DNA | 第33页 |
| ·RT-PC扩增本氏烟NbAG01和NbAG04基因片段 | 第33页 |
| ·序列测定和分析 | 第33-34页 |
| ·沉默载体构建 | 第34页 |
| ·农杆菌介导的浸润接种 | 第34-35页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第35页 |
| ·中国番茄黄化曲叶病毒Y10A及伴随的卫星DNA 注射攻毒 | 第35页 |
| ·三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA) | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-45页 |
| ·NbAGO1和NbAGO4的克隆及序列分析 | 第36-39页 |
| ·pTRV2沉默载体的构建 | 第39页 |
| ·AGO1和AGO4沉默后的症状与检测 | 第39-41页 |
| ·半定量RT-PCR分析AGO1和AGO4基因的mRNA水平 | 第41-43页 |
| ·用中国番茄黄化曲叶病毒Y10A及伴随的卫星DNA攻毒 | 第43页 |
| ·三抗体夹心.ELISA(TAS-ELISA) | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-55页 |
| 附录A:本论文所用缩写词及中英文对照 | 第55-57页 |
| 附录B:常用试剂的配制 | 第57-59页 |
| 附录C:常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第59-60页 |
| 个人简历 | 第60页 |
