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鼻咽癌T7噬菌体cDNA文库的构建和鼻咽癌血清自身抗体的筛选

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-20页
中英文对照第20-23页
前言第23-33页
 1、鼻咽癌肿瘤标志物第23-25页
 2、肿瘤自身抗体第25-33页
   ·肿瘤自身抗体用于早期诊断的依据第25-26页
   ·肿瘤自身抗体存在的证据第26-27页
   ·肿瘤自身抗体产生的机制第27-29页
   ·肿瘤自身抗体筛选策略第29-33页
技术路线第33-34页
第一章 鼻咽癌患者血清自身抗体的检测第34-46页
   ·材料与方法第34-39页
     ·材料第34-36页
       ·血清标本第34页
       ·细胞株第34页
       ·引物第34页
       ·主要试剂第34-35页
       ·主要仪器第35-36页
     ·实验方法第36-39页
       ·细胞培养第36页
       ·细胞总RNA提取第36页
       ·基因组DNA提取第36-37页
       ·鼻咽癌细胞株CNE1总蛋白的提取第37页
       ·逆转录PCR(Reverse Transcription PCR,RT-PCR)第37-38页
       ·酶联免疫吸附实验检测血清中抗体水平第38页
       ·Western印迹检测血清自身抗体第38页
       ·统计学处理第38-39页
   ·结果第39-43页
     ·Epstein-Barr病毒在鼻咽癌细胞株中的表达第39-40页
     ·鼻咽癌患者血清滴度检测第40-41页
     ·鼻咽癌患者血清中的肿瘤标志物分析第41-43页
   ·讨论第43-46页
第二章 鼻咽癌组织T7噬菌体cDNA文库的构建与筛选第46-72页
   ·材料与方法第46-59页
     ·材料第46-50页
       ·组织标本第46页
       ·血清标本第46页
       ·T7Select(?)10-3b载体第46-47页
       ·引物第47页
       ·细菌第47页
       ·主要试剂第47-48页
       ·常用溶液第48-49页
       ·主要仪器第49-50页
     ·方法第50-59页
       ·鼻咽癌组织mRNA的分离第50-51页
       ·cDNA第一链的合成第51-52页
       ·cDNA第二链的合成第52页
       ·双链末端修饰第52-53页
       ·连接EcoRⅠ/HindⅢ接头第53页
       ·EcoRⅠ和HindⅢ消化第53-54页
       ·插入片段纯化第54页
       ·连接第54-55页
       ·体外包装第55页
       ·原始文库滴度测定第55-56页
       ·噬菌体文库的放大第56页
       ·噬菌体文库的鉴定第56页
       ·免疫印迹第56-57页
       ·噬菌体文库的生物淘洗第57-58页
       ·PCR扩增与序列匹配分析第58-59页
   ·结果第59-69页
     ·鼻咽癌组织mRNA的分离第59-60页
     ·鼻咽癌组织T7噬菌体cDNA文库的构建第60页
     ·噬菌体文库原始滴度的测定第60-61页
     ·噬菌体文库的扩增第61-62页
     ·鼻咽癌组织T7噬菌体cDNA文库的鉴定第62页
     ·噬菌体文库的生物淘洗第62-65页
     ·重组噬菌体表达蛋白的分析第65-69页
   ·讨论第69-72页
第三章 鼻咽癌血清自身抗体的初步研究第72-93页
   ·材料与方法第72-78页
     ·材料第72-75页
       ·血清标本第72页
       ·细胞株第72页
       ·引物第72-73页
       ·主要试剂第73页
       ·主要溶液第73-74页
       ·主要仪器第74-75页
     ·方法第75-78页
       ·细胞培养第75页
       ·细胞总RNA提取第75页
       ·RT-PCR第75-76页
       ·T7噬菌体单克隆化第76页
       ·ELISA第76页
       ·免疫印迹第76页
       ·EHSA检测血清中自身抗体的亲和力第76-77页
       ·统计学处理第77-78页
   ·结果第78-89页
     ·RT-PCR检测BMI-1基因在鼻咽癌细胞株中的表达第78页
     ·鼻咽癌患者血清中抗BMI-1的自身抗体的检测第78-79页
     ·抗BMI-1自身抗体亲和力的检测第79-81页
     ·ELISA检测鼻咽癌患者血清中的针对BMI-1的自身抗体第81-82页
     ·免疫印迹检测鼻咽癌患者血清中抗CD44、MAGE和HSP70的自身抗体第82-83页
     ·抗CD44、MAGE和HSP70自身抗体亲和力的检测第83-84页
     ·ELISA分析鼻咽癌血清中抗CD44、MAGE、fibronectin和HSP70自身抗体第84-85页
     ·ROC分析抗CD44、MAGE、fibronectin和HSP70自身抗体作为鼻咽癌诊断标志物的分析第85-86页
     ·抗CD44、MAGE、fibronectin和HSP70自身抗体与鼻咽癌临床分期之间的关系第86-89页
   ·讨论第89-93页
结论第93-94页
参考文献第94-110页
综述第110-121页
致谢第121-122页
攻读学位期间主要的研究成果第122页

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