| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| ·木聚糖 | 第10-11页 |
| ·乙酰木聚糖酯酶 | 第11-12页 |
| ·蛋白质糖基化的研究进展 | 第12-16页 |
| ·糖基化的分类 | 第12-13页 |
| ·N-糖基化的结构和类型 | 第13-14页 |
| ·酵母中 N-糖基化过程 | 第14-15页 |
| ·N-糖基化的确定 | 第15页 |
| ·N-糖基化的作用及在蛋白质工程中的应用 | 第15-16页 |
| ·CBM 的研究进展 | 第16-19页 |
| ·CBM 的命名 | 第17页 |
| ·CBM 的分类及吸附位点特征 | 第17-18页 |
| ·CBM 的作用及其应用 | 第18-19页 |
| ·课题研究的背景及意义 | 第19-20页 |
| ·本课题拟解决的问题和研究目的 | 第20页 |
| ·本论文主要研究的内容 | 第20-21页 |
| ·本文的主要创新点 | 第21-22页 |
| 第二章 N-糖基化对 AXE1 的分泌、活力以及稳定性影响 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·药品 | 第22页 |
| ·仪器 | 第22-23页 |
| ·酵母培养基 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·重组酵母 axe1-pPICZαA-KM71H 的液体培养 | 第24页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯化蛋白 | 第25页 |
| ·衣霉素对酵母菌体生长以及对 AXE1 分泌的影响 | 第25-26页 |
| ·N-糖基化对 AXE1 酶学性质的影响 | 第26-27页 |
| ·结果和讨论 | 第27-33页 |
| ·衣霉素对 AXE1 在毕赤酵母中分泌的影响 | 第27-30页 |
| ·体内体外去 N-糖基化的 AXE1 的酶学研究 | 第30-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 不同位点 N-糖基化对 AXE1 分泌、活力及稳定性影响的研究 | 第34-64页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·质粒、引物以及测序 | 第34页 |
| ·药品 | 第34页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-42页 |
| ·N-糖基化位点的预测 | 第35页 |
| ·定点突变的方法构建突变体基因 | 第35-39页 |
| ·重组质粒转入巴斯德毕赤酵母 | 第39-41页 |
| ·重组酵母的液体培养及突变体蛋白分泌水平定量检测 | 第41页 |
| ·突变体蛋白的亲和纯化 | 第41页 |
| ·突变体蛋白的酶学研究 | 第41页 |
| ·AXE1 及其突变体蛋白二级结构的研究 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-63页 |
| ·AXE1 中 N-糖基化位点的预测 | 第42-43页 |
| ·突变体基因的构建及表达 | 第43-46页 |
| ·重组表达质粒 n99a-pPICZαA 转入酵母中 | 第46页 |
| ·AXE1 两个位点 N-糖基化的确认 | 第46-47页 |
| ·31 号位 N-糖基化缺失的研究 | 第47-51页 |
| ·99 号位 N-糖基化缺失的研究 | 第51-54页 |
| ·31 位和 99 位 N-糖基化同时缺失的研究 | 第54-57页 |
| ·AXE1 及其突变体 T33A、N99A 和 T33AN99A 结构的研究 | 第57-58页 |
| ·增加一个 N-糖基化的研究 | 第58-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第四章 AXE1 吸附域的改造 | 第64-83页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·菌种 | 第64页 |
| ·质粒 | 第64页 |
| ·药品 | 第64页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第64页 |
| ·仪器 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-72页 |
| ·Cfcbm2b-2 和 Ctcbm6 的人工合成 | 第65-69页 |
| ·毕赤酵母重组表达质粒的构建 | 第69-71页 |
| ·重组质粒电转化毕赤酵母 | 第71页 |
| ·重组毕赤酵母的液体培养及重组蛋白检测 | 第71页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第71页 |
| ·对木聚糖的等温吸附实验 | 第71-72页 |
| ·比活力的测定 | 第72页 |
| ·结果和讨论 | 第72-82页 |
| ·Cfcbm2b-2 和 Ctcbm6 基因的合成 | 第72-75页 |
| ·酵母表达载体 pPICZαA-axe1cd-cbm2b-2 的构建 | 第75-77页 |
| ·表达载体的线性化及电转酵母 KM71H | 第77-78页 |
| ·重组子的液体培养及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第78-79页 |
| ·AXE1CD-CBM2b-2 以及 AXE1CD-CBM6 纯化的电泳检测 | 第79页 |
| ·对木聚糖的吸附 | 第79-82页 |
| ·对不同底物的催化能力 | 第82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 总结和展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
