氯氰菊酯降解菌LQ-3的分离鉴定、降解特性研究及其水解酶基因的克隆
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 氯氰菊酯农药特性与生产使用概况 | 第13-15页 |
| ·氯氰菊酯的理化性质 | 第13-14页 |
| ·氯氰菊酯的作用特点及机理 | 第14页 |
| ·氯氰菊酯的使用和残留情况 | 第14页 |
| ·氯氰菊酯的毒性及毒害机理 | 第14-15页 |
| 2 自然界中农药的降解方式 | 第15-16页 |
| ·农药的非生物降解 | 第15-16页 |
| ·农药的生物降解 | 第16页 |
| 3 拟除虫菊酯类农药的微生物降解 | 第16-20页 |
| ·降解拟除虫菊酯类农药的微生物种类 | 第16-18页 |
| ·微生物降解拟除虫菊酯类农药的机理 | 第18页 |
| ·氯氰菊酯农药水解酶的研究 | 第18-19页 |
| ·氯氰菊酯的微生物代谢途径 | 第19-20页 |
| ·微生物对氯氰菊酯降解基因的研究 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 第一章 氯氰菊酯降解菌LQ-3的分离与鉴定 | 第25-37页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·菌株、培养基与试剂 | 第25页 |
| ·降解菌株的驯化与分离 | 第25-26页 |
| ·降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第26页 |
| ·降解菌株的16S rRNA基因序列的测定 | 第26-28页 |
| ·降解菌株系统发育地位的确定 | 第28页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-35页 |
| ·污染土壤中氯氰菊酯降解菌株的分离 | 第29页 |
| ·降解菌株LQ-3的菌落形态及生理生化特征 | 第29-30页 |
| ·降解菌株LQ-3对抗生素的耐受性 | 第30页 |
| ·降解菌株LQ-3的基因组DNA提取 | 第30-31页 |
| ·降解菌株LQ-3的鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·LQ-3的生长曲线 | 第32-33页 |
| ·环境条件对降解菌株LQ-3生长的影响 | 第33-35页 |
| 3 结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-37页 |
| 第二章 氯氰菊酯降解菌LQ-3降解特性研究 | 第37-43页 |
| 1 材料与方法 | 第37-38页 |
| ·培养基与试剂 | 第37页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第37页 |
| ·菌株LQ-3对拟除虫菊酯类农药降解特性研究 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·营养物质对LQ-3降解氯氰菊酯的影响 | 第38页 |
| ·LQ-3的生长与氯氰菊酯降解的关系 | 第38-39页 |
| ·pH对LQ-3降解氯氰菊酯的影响 | 第39页 |
| ·温度对LQ-3降解氯氰菊酯的影响 | 第39-40页 |
| ·接种量对LQ-3降解氯氰菊酯的影响 | 第40页 |
| ·LQ-3对不同拟除虫菊酯的降解 | 第40-41页 |
| 3 结论 | 第41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第三章 氯氰菊酯降解菌LQ-3酶学的初步研究 | 第43-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·培养基与试剂 | 第43页 |
| ·粗酶液的制备 | 第43-44页 |
| ·化学品 | 第44页 |
| ·酶活性的测定 | 第44页 |
| ·氯氰菊酯降解酶的定域试验 | 第44页 |
| ·氯氰菊酯降解酶基因的定位 | 第44页 |
| ·底物对酶的诱导试验 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-50页 |
| ·氯氰菊酯降解酶反应体系的建立 | 第45-47页 |
| ·氯氰菊酯降解酶的特性 | 第47-50页 |
| 3 结论 | 第50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第四章 氯氰菊酯水解酶基因的克隆 | 第53-63页 |
| 1 材料与方法 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·LQ-3总DNA的提取 | 第54页 |
| ·质粒pUC19 DNA的提取 | 第54页 |
| ·基因组DNA酶切体系 | 第54页 |
| ·质粒pUC19酶切体系 | 第54页 |
| ·质粒pUC19的脱磷酸化 | 第54页 |
| ·连接体系 | 第54-55页 |
| ·E.coli DH5α超级感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·转化 | 第55-56页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第56页 |
| ·重组质粒的提取 | 第56页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第56页 |
| ·重组子对农药的降解性能检测 | 第56页 |
| ·目的基因的测序与分析 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-60页 |
| ·基因组总DNA,pUC19质粒的提取 | 第56-57页 |
| ·基因组DNA和载体pUC19的酶切 | 第57页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第57-58页 |
| ·重组子的质粒提取及酶切验证 | 第58-59页 |
| ·重组子降解能力的测定 | 第59-60页 |
| ·目的基因的测序与分析 | 第60页 |
| 3 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 全文总结 | 第63-65页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第65-67页 |
| 附录二 相关DNA序列 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第75页 |
