| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-9页 |
| 绪论 | 第9-19页 |
| 第一章 材料与方法 | 第19-35页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·菌株和载体 | 第19页 |
| ·细胞 | 第19页 |
| ·实验仪器与设备 | 第19页 |
| ·主要试剂和器皿 | 第19-21页 |
| ·试剂配方 | 第21-23页 |
| ·RT-PCR引物 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-35页 |
| ·携带有目的基因的慢病毒载体的制备 | 第23-26页 |
| ·慢病毒的生产 | 第26-30页 |
| ·大量提取慢病毒包装质粒 | 第26-27页 |
| ·293T细胞的扩培与冻存 | 第27-28页 |
| ·磷酸钙法转染293T细胞,大量生产慢病毒 | 第28-29页 |
| ·慢病毒液的收集与浓缩 | 第29页 |
| ·测定病毒滴度 | 第29页 |
| ·最佳MOI的确定 | 第29-30页 |
| ·牙髓干细胞的培养及感染 | 第30-31页 |
| ·被感染后牙髓干细胞的鉴定 | 第31-35页 |
| ·RT-PCR | 第31-32页 |
| ·测定碱性磷酸酶活性 | 第32-33页 |
| ·HE染色 | 第33页 |
| ·免疫组化 | 第33页 |
| ·茜素红染色测钙化 | 第33-35页 |
| 第二章 实验结果 | 第35-49页 |
| ·牙髓干细胞的体外分离和培养 | 第35页 |
| ·构建携带目的基因的慢病毒载体的鉴定 | 第35-40页 |
| ·慢病毒生产后的鉴定 | 第36-38页 |
| ·慢病毒滴度的测定 | 第38-39页 |
| ·最佳感染复数的确定 | 第39-40页 |
| ·过表达后牙髓干细胞组织形态的变化 | 第40-41页 |
| ·过表达后牙髓干细胞牙向分化的检测 | 第41-49页 |
| ·RT-PCR检测过表达后的牙髓干细胞能够表达DSPP | 第41-42页 |
| ·过表达的牙髓干细胞能够提高碱性磷酸酶活性 | 第42-44页 |
| ·过表达的牙髓干细胞能够分泌牙本质细胞特异性蛋白 | 第44-47页 |
| ·茜素红检测钙化程度 | 第47-49页 |
| 第三章 分析与讨论 | 第49-53页 |
| ·过表达基因BMP4、MSX1和PAX9的选择 | 第49-50页 |
| ·影响慢病毒转染效率的因素及MOI的确定 | 第50页 |
| ·牙髓干细胞牙向分化的检测 | 第50-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-55页 |
| ·成功构建分别携带三种目的基因的慢病毒载体 | 第53页 |
| ·生产出具有高滴度的三种病毒并确定最佳感染复数 | 第53页 |
| ·过表达的牙髓干细胞能够向牙齿方向分化 | 第53页 |
| ·基因MSX1能够增强牙髓干细胞牙向分化的能力 | 第53-55页 |
| 附录1 质粒图谱 | 第55-57页 |
| 附录2 测序报告单 | 第57-63页 |
| 附录3 英文缩略语表 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 个人简历 | 第77页 |