| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-12页 |
| 第2章 材料与方法 | 第12-27页 |
| ·试剂及仪器 | 第12-14页 |
| ·实验步骤 | 第14-26页 |
| ·试剂的配制 | 第14-15页 |
| ·细胞培养 | 第15-17页 |
| ·人骨形态发生蛋白7基因hBMP-7慢病毒载体的构建 | 第17页 |
| ·rMSCs的特异性鉴定及生物学特性 | 第17-18页 |
| ·Lentivirus-hBMP-7及空病毒载体对rMSCs的转染 | 第18-22页 |
| ·Lv-hBMP-7 对转染后rMSCs 增殖活性的测定 | 第22-23页 |
| ·建立大鼠肾上皮细胞株 NRK-52E 缺氧复氧模型(H/R)及共培养 | 第23-25页 |
| ·检测H/R肾上皮细胞微环境下hBMP-7对rMSCs诱导分化情况的影响 | 第25-26页 |
| ·统计学处理: | 第26-27页 |
| 第3章 结果 | 第27-42页 |
| ·细胞培养 | 第27-29页 |
| ·大鼠肾上皮细胞株NRK-52E稳定传代扩增 | 第27页 |
| ·rMSCs的分离和原代培养 | 第27页 |
| ·rMSCs的传代培养 | 第27-28页 |
| ·rMSCs生长曲线及贴壁率曲线 | 第28-29页 |
| ·rMSCs免疫细胞化学鉴定 | 第29页 |
| ·骨形成蛋白-7(BMP-7)慢病毒载体构建成功及酶切电泳鉴定 | 第29-30页 |
| ·Lentivirus-hBMP-7 对rMSCs 转染效率及外源基因的检测 | 第30-31页 |
| ·Lentivirus-hBMP-7 对 rMSCs 转染效率的判定 | 第30页 |
| ·细胞免疫荧光检测病毒转染后细胞 hBMP-7 的表达 | 第30页 |
| ·RT-PCR 分析转染后hBMP-7 的表达 | 第30页 |
| ·Elisa 检测病毒转染后细胞上清 BMP-7 的表达: | 第30-31页 |
| ·测定Lv-hBMP-7 对转染后rMSCs 的增殖活性的影响 | 第31-34页 |
| ·Brdu 掺入法检测 Lv-hBMP-7 转染后 rMSCs 的增殖活性的影响 | 第31页 |
| ·MTT 法测定 Lv-hBMP-7 对转染后 rMSCs 的增殖活性的作用 | 第31-32页 |
| ·流式细胞分析检测转染hBMP-7后细胞增殖活性的变化 | 第32-34页 |
| ·流式细胞仪检测缺氧复氧(H/R)模型凋亡 | 第34-35页 |
| ·肾实质细胞缺 H/R 微环境下 hBMP-7 对 rMSCs 分化情况的影响 | 第35-37页 |
| ·RT-PCR 检测诱导后 rMSCs 的 E-cadherin 基因水平表达情况 | 第35页 |
| ·细胞形态及细胞免疫化学检测诱导后 rMSCs 的 CK-18 表达情况 | 第35页 |
| ·流式细胞分析诱导后第 18 型角蛋白阳性表达率 | 第35-37页 |
| 附部分免疫组化染色图片 | 第37-42页 |
| 第4章 讨论 | 第42-52页 |
| ·急性肾脏损伤的主要机制及研究现状 | 第42-43页 |
| ·BMP7 对急性肾脏损伤的保护作用 | 第43-45页 |
| ·骨髓间充质干细胞向肾实质细胞的分化 | 第45-48页 |
| ·BMSCs 在细胞治疗和基因治疗中的应用及存在的问题 | 第48-49页 |
| ·载体及标记方法的选择 | 第49-52页 |
| 第5章 结论及展望 | 第52-53页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 附录 1: BMP7 基因信息 | 第58-60页 |
| 附 2:Invitrogen 测序报告 | 第60-61页 |
| 综述 | 第61-68页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第68页 |
