| 摘要 | 第1-25页 |
| ABSTRACT | 第25-33页 |
| 缩略语表 | 第33-34页 |
| 第一章 前言 | 第34-56页 |
| 1 活性氧族(ROS) | 第34页 |
| 2 超氧化物歧化酶 | 第34-39页 |
| ·超氧化物歧化酶的研究与应用 | 第34-36页 |
| ·超氧化物歧化酶的来源、种类和分布 | 第35页 |
| ·超氧化物歧化酶的结构和理化特性 | 第35-36页 |
| ·超氧化物歧化酶基因及其克隆、表达和调控 | 第36-37页 |
| ·超氧化物歧化酶的制备 | 第37-38页 |
| ·动物源超氧化物歧化酶 | 第37页 |
| ·植物源超氧化物歧化酶 | 第37页 |
| ·酶法生产超氧化物歧化酶 | 第37页 |
| ·基因重组人源超氧化物歧化酶生产方法 | 第37-38页 |
| ·超氧化物歧化酶在临床上的应用 | 第38-39页 |
| ·运用基因敲除和转基因动物模型研究超氧化物歧化酶放射防护作用 | 第39页 |
| ·超氧化物歧化酶非肽模拟物的放射防护作用 | 第39页 |
| 3 超氧化物歧化酶的化学修饰 | 第39-54页 |
| ·超氧化物歧化酶化学修饰的概况 | 第39-41页 |
| ·超氧化物歧化酶化学修饰后的特性变化 | 第41-44页 |
| ·当前超氧化物歧化酶化学修饰还待解决的问题 | 第44页 |
| ·利用功能性材料实现超氧化物歧化酶的靶向性修饰 | 第44-48页 |
| ·功能性多糖清除ROS的作用机理 | 第45-46页 |
| ·多糖对超氧化物歧化酶进行靶向性修饰的可行性 | 第46-48页 |
| ·设计超氧化物歧化酶化学修饰的注意点 | 第48页 |
| ·酶化学修饰方法的选择 | 第48-53页 |
| ·修饰反应专一性的控制 | 第48-51页 |
| ·修饰程度和修饰部位的测定 | 第51-53页 |
| ·对超氧化物歧化酶特殊氨基酸残基侧链基团的化学修饰 | 第53页 |
| ·超氧化物歧化酶化学修饰展望 | 第53-54页 |
| 4 本课题已有的研究基础 | 第54页 |
| 5 本课题拟解决的问题 | 第54-56页 |
| 第二章 Hep-SOD结合物的制备及二级结构的研究 | 第56-66页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·仪器 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| ·超氧化物歧化酶蛋白含量的测定 | 第57页 |
| ·超氧化物歧化酶活性测定 | 第57页 |
| ·酶蛋白自由氨基修饰率的测定 | 第57页 |
| ·Hep-SOD结合物的制备 | 第57-58页 |
| ·肝素的活化 | 第57-58页 |
| ·肝素对超氧化物歧化酶的修饰 | 第58页 |
| ·Hep-SOD的分离 | 第58页 |
| ·超氧化物歧化酶修饰反应液的预处理 | 第58页 |
| ·Hep-SOD的DEAE-Sepharose Fast Flow层析分离 | 第58页 |
| ·Hep-SOD的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第58页 |
| ·Hep-SOD分级产品的理化性质 | 第58-59页 |
| ·Hep-SOD分级产品肝素与超氧化物歧化酶比值测定 | 第58-59页 |
| ·Hep-SOD分级产品酶比活比较 | 第59页 |
| ·Hep-SOD结合物的二级结构的研究 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-62页 |
| ·肝素对超氧化物歧化酶的化学修饰 | 第59-60页 |
| ·修饰产物的酶活保持率和自由氨基修饰率 | 第59页 |
| ·修饰产物的的电泳鉴定 | 第59-60页 |
| ·Hep-SOD的分级分离 | 第60页 |
| ·Hep-SOD分级产品的理化性质 | 第60-61页 |
| ·肝素与超氧化物歧化酶比值 | 第60-61页 |
| ·Hep-SOD分级产品酶比活比较 | 第61页 |
| ·Hep-SOD和超氧化物歧化酶的二级结构CD谱分析 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| ·肝素对超氧化物歧化酶的修饰 | 第62-63页 |
| ·Hep-SOD的分级分离 | 第63-64页 |
| ·CD谱对二级结构的分析 | 第64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 第三章 低分子季铵化壳聚糖对超氧化物歧化酶的化学修饰 | 第66-79页 |
| 1 材料 | 第66-67页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·仪器 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-70页 |
| ·超氧化物歧化酶酶活测定 | 第67页 |
| ·等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳比较修饰率 | 第67页 |
| ·TMC的制备 | 第67-68页 |
| ·壳聚糖的N,N,N-三甲基季铵化 | 第67页 |
| ·离子交换 | 第67-68页 |
| ·红外光谱(AIR-FTIR)测定 | 第68页 |
| ·TMC季铵化度的测定 | 第68页 |
| ·TMC对超氧化物歧化酶的化学修饰 | 第68-69页 |
| ·EDC缩合法制备TMC-SOD结合物 | 第68页 |
| ·修饰反应酶活保留率测定 | 第68页 |
| ·修饰反应电泳鉴定 | 第68-69页 |
| ·非共价结合作用的考察 | 第69页 |
| ·TMC-SOD的分级分离 | 第69页 |
| ·超氧化物歧化酶修饰反应液的预处理 | 第69页 |
| ·TMC-SOD的DEAE-Sepharose Fast Flow层析分离 | 第69页 |
| ·TMC-SOD的电泳鉴定 | 第69页 |
| ·TMC-SOD分级产品的初步筛选 | 第69页 |
| ·TMC-SOD结合物二级结构的研究 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-76页 |
| ·TMC的制备 | 第70-71页 |
| ·修饰反应IEF-PAGE电泳 | 第71-72页 |
| ·非共价结合作用的考察 | 第72页 |
| ·修饰产物TMC-SOD的层析分离 | 第72-73页 |
| ·层析分级产物TMC-SOD的IEF-PAGE电泳鉴定 | 第73-74页 |
| ·TMC-SOD分级分离产品中TMC与超氧化物歧化酶比值 | 第74页 |
| ·TMC-SOD分级分离产品酶比活比较 | 第74页 |
| ·TMC-SOD结合物的二级结构研究 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| ·TMC的制备 | 第76页 |
| ·TMC对超氧化物歧化酶的修饰 | 第76-77页 |
| ·TMC-SOD的分级分离 | 第77页 |
| ·TMC-SOD二级结构的变化 | 第77-78页 |
| ·TMC-SOD分级产品的初步筛选 | 第78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 第四章 超氧化物歧化酶及其衍生物对巨噬细胞的亲和力以及对辐射诱导的炎症细胞因子的表达作用研究 | 第79-95页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| ·试剂 | 第79-80页 |
| ·动物和细胞株 | 第80页 |
| ·仪器 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-85页 |
| ·小鼠腹腔巨噬细胞的制备 | 第80页 |
| ·孵育细胞内超氧化物歧化酶活性和总抗氧能力(T-AOC)的测定 | 第80-81页 |
| ·秋水仙素对孵育细胞内超氧化物歧化酶活性和T-AOC的影响 | 第81页 |
| ·孵育细胞抑制超氧阴离子释放能力的测定 | 第81-82页 |
| ·流式细胞仪检测超氧化物歧化酶及其结合物对巨噬细胞的结合能力 | 第82页 |
| ·FITC标记超氧化物歧化酶及其结合物 | 第82页 |
| ·流式细胞仪检测FITC-SOD及其结合物对巨噬细胞结合能力 | 第82页 |
| ·激光共聚焦显微镜测定超氧化物歧化酶及其衍生物在细胞内的分布 | 第82页 |
| ·超氧化物歧化酶及其衍生物对辐射诱导的炎症细胞因子表达的影响 | 第82-83页 |
| ·3T3细胞的培养及传代 | 第82-83页 |
| ·细胞分组及照射 | 第83页 |
| ·细胞因子的测定 | 第83页 |
| ·MTT法测定超氧化物歧化酶结合物对细胞的毒性作用 | 第83-85页 |
| ·溶液的配制 | 第83-84页 |
| ·对巨噬细胞的细胞毒研究 | 第84-85页 |
| ·数据处理 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-92页 |
| ·超氧化物歧化酶结合物对细胞内酶活性的影响 | 第85-86页 |
| ·SOD结合物对孵育细胞T-AOC的影响 | 第86-87页 |
| ·超氧化物歧化酶结合物对孵育细胞抑制超氧阴离子释放能力的作用 | 第87-88页 |
| ·流式细胞检测超氧化物歧化酶结合物对巨噬细胞结合能力的强弱 | 第88页 |
| ·激光共聚焦显微镜测定超氧化物歧化酶及其衍生物在细胞内的分布 | 第88-89页 |
| ·超氧化物歧化酶结合物对辐射诱导的炎症细胞因子表达的影响 | 第89-90页 |
| ·超氧化物歧化酶结合物对巨噬细胞增殖的影响 | 第90-92页 |
| ·Hep-SOD对巨噬细胞的影响 | 第90-91页 |
| ·TMC-SOD对巨噬细胞的影响 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-94页 |
| ·两种结合物对巨噬细胞亲和能力的研究 | 第92-93页 |
| ·超氧化物歧化酶结合物对炎症细胞因子的表达影响 | 第93-94页 |
| ·两种结合物对巨噬细胞的增殖性研究 | 第94页 |
| 5 小结 | 第94-95页 |
| 第五章 Hep-SOD结合物对急性肝损伤和肝纤维化的防治作用 | 第95-109页 |
| 1 材料 | 第95-96页 |
| ·试剂 | 第95-96页 |
| ·动物 | 第96页 |
| ·仪器 | 第96页 |
| 2 方法 | 第96-100页 |
| ·Hep-SOD对CCl_4诱导的急性肝损伤的保护作用研究 | 第96-97页 |
| ·动物分组 | 第96页 |
| ·CCl_4急性肝损伤模型的诱导 | 第96页 |
| ·生化指标的测定 | 第96-97页 |
| ·Hep-SOD对CCl_4诱导的肝纤维化的保护作用研究 | 第97-100页 |
| ·动物分组 | 第97页 |
| ·CCl_4肝纤维化模型的诱导 | 第97页 |
| ·羟脯氨酸含量测定 | 第97页 |
| ·RT-PCR测定TGF-β1、fibronectin、collagen-Ⅰ和MMP-2 | 第97-99页 |
| ·Western blotting测定肝组织TGF-β1蛋白的表达 | 第99-100页 |
| ·组织病理学研究 | 第100页 |
| ·数据处理 | 第100页 |
| 3 结果 | 第100-105页 |
| ·对急性肝损伤的保护作用 | 第100-101页 |
| ·对肝纤维化的保护作用 | 第101-105页 |
| ·动物的一般状态 | 第101-102页 |
| ·肝组织病理学研究 | 第102-103页 |
| ·肝组织羟脯氨酸测定 | 第103-104页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第104-105页 |
| ·Western blotting检测 | 第105页 |
| 4 讨论 | 第105-109页 |
| ·Hep-SOD结合物对CCl_4诱导的急性肝损伤的保护作用 | 第105-106页 |
| ·Hep-SOD结合物对CCl_4诱导的肝纤维化的防治作用 | 第106-109页 |
| 第六章 TMC-SOD对CCl_4诱导的急性肝损伤和肝纤维化的保护作用 | 第109-121页 |
| 1 材料 | 第109-110页 |
| ·试剂 | 第109页 |
| ·动物 | 第109-110页 |
| ·仪器 | 第110页 |
| 2 方法 | 第110-112页 |
| ·TMC-SOD对CCl_4诱导的急性肝损伤的保护作用研究 | 第110-111页 |
| ·动物分组 | 第110页 |
| ·CCl_4急性肝损伤模型 | 第110页 |
| ·生化指标的测定 | 第110-111页 |
| ·TMC-SOD对CCl_4诱导的肝纤维化的保护作用研究 | 第111-112页 |
| ·动物分组 | 第111页 |
| ·CCl_4肝纤维化模型 | 第111页 |
| ·组织病理学研究 | 第111页 |
| ·羟脯氨酸测定 | 第111页 |
| ·RT-PCR测定TGF-β1、fibronectin、collagen-Ⅰ和MMP-2 | 第111-112页 |
| ·Western blotting测定TGF-β1基因的表达 | 第112页 |
| ·数据处理 | 第112页 |
| 3 结果 | 第112-118页 |
| ·对急性肝损伤的保护作用 | 第112-114页 |
| ·对肝纤维化的保护作用 | 第114-116页 |
| ·动物的一般状态 | 第114页 |
| ·肝组织病理学 | 第114-116页 |
| ·肝组织羟脯氨酸测定结果 | 第116页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第116-117页 |
| ·Western blotting检测结果 | 第117-118页 |
| 4 讨论 | 第118-121页 |
| 第七章 超氧化物歧化酶修饰产物在小鼠体内的药代动力学研究 | 第121-132页 |
| 1 材料 | 第121-122页 |
| ·试剂 | 第121页 |
| ·仪器 | 第121页 |
| ·动物 | 第121-122页 |
| 2 方法 | 第122-123页 |
| ·超氧化物歧化酶,Hep-SOD和TMC-SOD的放射标记 | 第122-123页 |
| ·Iodogen反应管的制备 | 第122页 |
| ·超氧化物歧化酶及其衍生物的~(125)Ⅰ标记反应 | 第122页 |
| ·超氧化物歧化酶及其衍生物~(125)Ⅰ放射标记产物的层析分离 | 第122-123页 |
| ·碘标试药在小鼠血液半衰期和体内分布 | 第123页 |
| ·数据统计分析 | 第123页 |
| 3 结果 | 第123-129页 |
| ·超氧化物歧化酶及其衍生物~(125)Ⅰ标记结果 | 第123-125页 |
| ·~(125)Ⅰ-SOD,~(125)Ⅰ-Hep-SOD,~(125)Ⅰ-TMC-SOD层析分离 | 第123-125页 |
| ·~(125)Ⅰ-Hep-SOD,~(125)Ⅰ-TMC-SOD和~(125)Ⅰ-SOD质量指标 | 第125页 |
| ·超氧化物歧化酶结合物在小鼠体内的药物代谢动力学 | 第125-127页 |
| ·超氧化物歧化酶及其结合物在正常小鼠体内分布 | 第127-129页 |
| 4 讨论 | 第129-131页 |
| 5 结论 | 第131-132页 |
| 总结与展望 | 第132-134页 |
| 1 论文主要结论 | 第132-133页 |
| 2 展望 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-154页 |
| Attenuation effects of heparin-SOD conjugate on bleomycin-induced lung fibrosis in vivo and radiation-induced inflammatory cytokine expression in vitro | 第154-162页 |
| Augmented inhibitory efect of superoxide dismutase on superoxide anion release from macrophages by chemical modifcation with polysaccharide and attenuation efects on radiation-induced infammatory cytokine expression in vitro | 第162-171页 |
| The preventive effects of heparin-SOD on carbon tetrachloride-induced acute liver failure and hepatic fibrosis in mice | 第171-181页 |
| Pharmacokinetic analysis of disposition in vivo of Heparin-SOD | 第181-199页 |
| 致谢 | 第199-200页 |
| 博士期间撰写的论文 | 第200-201页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第201页 |
