| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-15页 |
| Abstract | 第15-20页 |
| 缩略表 | 第20-23页 |
| 第一章 前言 | 第23-53页 |
| 1 流体剪切力影响骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展 | 第23-30页 |
| ·产生流体剪切的生物反应器 | 第24-26页 |
| ·多孔隙支架 | 第26-28页 |
| ·流体剪切力影响骨髓间充质成骨分化的研究情况 | 第28-30页 |
| ·流体剪切力对hMSCs形态的影响 | 第28页 |
| ·流体剪切与hMSCs的成骨分化特征性基因的表达 | 第28-30页 |
| 2. 流体剪切力影响骨髓间充质干细胞成骨分化的机制研究进展 | 第30-40页 |
| ·β1整合素/FAK与力学信号传导 | 第30-34页 |
| ·ERKI/2信号通路 | 第34-36页 |
| ·成骨分化相关转录因子-Runx2 | 第36-37页 |
| ·BMPs/Smad信号通路 | 第37-39页 |
| ·核转录因子NFKB | 第39-40页 |
| 3. 总结 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-53页 |
| 第二章 流体剪切力促进骨髓间充质干细胞成骨分化依赖于ERK1/2活化 | 第53-80页 |
| 前言 | 第53-55页 |
| 1.材料与方法 | 第55-66页 |
| ·材料 | 第55-58页 |
| ·细胞来源 | 第55页 |
| ·PLGA-3D支架 | 第55页 |
| ·主要实验仪器 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·抗体 | 第56页 |
| ·常用试剂配制 | 第56-58页 |
| ·实验方法 | 第58-65页 |
| ·hMSCs的分离与培养 | 第58-59页 |
| ·流体剪切力的施加 | 第59-60页 |
| ·PD98059处理细胞 | 第60页 |
| ·RT-PCR | 第60-61页 |
| ·样品总RNA提取 | 第60-61页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第61页 |
| ·PCR | 第61页 |
| ·ALP活性测定 | 第61-63页 |
| ·定性检测ALP活性 | 第62-63页 |
| ·定量检测ALP活性 | 第63页 |
| ·western-blot | 第63-65页 |
| ·SDS-PAGE | 第63页 |
| ·转膜 | 第63-64页 |
| ·western-blot | 第64-65页 |
| ·统计学方法 | 第65-66页 |
| 2. 实验结果 | 第66-73页 |
| ·间歇性FSS比持续性FSS能更有效地提高hMSCs的ALP活性 | 第66-69页 |
| ·间歇性FSS能显著促进hMSCs的成骨分化相关基因表达 | 第69-72页 |
| ·间歇性FSS能显著提高hMSCs的ERK1/2活性 | 第72页 |
| ·间歇FSS促进hMSCs向成骨细胞分化有赖于ERK1/2的活化 | 第72-73页 |
| 3. 讨论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 第三章 β1整合素/FAK信号通路在FSS促进hMSCs成骨分化中的作用 | 第80-105页 |
| 前言 | 第80-82页 |
| 1. 材料与方法 | 第82-91页 |
| ·材料 | 第82-85页 |
| ·细胞来源 | 第82页 |
| ·PLGA-3D支架 | 第82页 |
| ·主要实验仪器 | 第82-83页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·抗体 | 第83-84页 |
| ·常用试剂配制 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-91页 |
| ·hMSCs的分离与培养 | 第85页 |
| ·流体剪切力的施加 | 第85-86页 |
| ·western-blot | 第86页 |
| · | 第86-88页 |
| ·SDS-PAGE | 第86页 |
| ·转膜 | 第86-87页 |
| ·western-blot | 第87-88页 |
| ·免疫共沉淀 | 第88-90页 |
| ·样品准备 | 第88-89页 |
| ·免疫沉淀反应 | 第89-90页 |
| ·PD98059处理细胞 | 第90页 |
| ·RGDS小分子多肽处理细胞 | 第90-91页 |
| ·统计学方法 | 第91页 |
| 2. 实验结果 | 第91-96页 |
| ·FSS所导致的ERK1/2的活化能提高Runx2的转录活性 | 第91-94页 |
| ·FSS引起的ERK1/2活化依赖于β1整合素对FSS所产生的力学刺激的感知 | 第94-96页 |
| ·FSS所导致的β1整合素表达升高受ERK1/2活性影响 | 第96页 |
| 3. 讨论 | 第96-100页 |
| 4. 参考文献 | 第100-105页 |
| 第四章 ERK1/2通过与多条信号通路之间cross-talking调节β1整合素和Runx2的表达 | 第105-142页 |
| 前言 | 第105-107页 |
| 1 材料和方法 | 第107-120页 |
| ·材料 | 第107-111页 |
| ·细胞来源 | 第107-108页 |
| ·PLGA-3D支架 | 第108页 |
| ·主要实验仪器 | 第108页 |
| ·主要试剂 | 第108-109页 |
| ·抗体 | 第109页 |
| ·常用试剂配制 | 第109-111页 |
| ·实验方法 | 第111-120页 |
| ·hMSCs的分离与培养 | 第111页 |
| ·流体剪切力的施加 | 第111-112页 |
| ·RT-PCR | 第112-114页 |
| ·样品总RNA提取 | 第112-113页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第113页 |
| ·PCR | 第113-114页 |
| ·western-blot | 第114-117页 |
| ·SDS-PAGE | 第114-115页 |
| ·转膜 | 第115-116页 |
| ·western-blot | 第116-117页 |
| ·免疫荧光染色 | 第117-119页 |
| ·石蜡切片制备 | 第117页 |
| ·切片脱蜡、水化 | 第117页 |
| ·抗原修复 | 第117-118页 |
| ·免疫荧光染色 | 第118-119页 |
| ·PD98059处理细胞 | 第119页 |
| ·BAY11-7082处理细胞 | 第119-120页 |
| ·人重组noggin蛋白处理细胞 | 第120页 |
| ·统计学方法 | 第120页 |
| 2. 实验结果 | 第120-133页 |
| ·FSS使hMSCs内的BMP2和BMP4表达水平明显升高 | 第120-122页 |
| ·FSS导致的BMPs/Smad1/5/8信号通路活化能影响对Runx2的表达 | 第122-124页 |
| ·NFκB在FSS促进BMP2、BMP4和Runx2表达的过程中起重要的调节作用 | 第124-129页 |
| ·NFκB在FSS促进β1整合素表达的过程中起重要的调节作用 | 第129-131页 |
| ·FSS所导致的BMP/Smad信号通路和NFKB活化依赖于ERK1/2的活化 | 第131-133页 |
| 3. 讨论 | 第133-136页 |
| 参考文献 | 第136-142页 |
| 结论 | 第142-147页 |
| 博士期间发表的主要论文 | 第147-148页 |
