| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·各类小RNA的产生机制 | 第14-17页 |
| ·siRNA的产生 | 第14-15页 |
| ·miRNA的产生 | 第15-16页 |
| ·piRNA的产生 | 第16-17页 |
| ·环境RNAI | 第17-19页 |
| ·环境RNAi的定义 | 第18-19页 |
| ·环境RNAi的相关蛋白 | 第19页 |
| ·RNAI正负调控因子的研究进展 | 第19-21页 |
| ·RDRP对siRNA的扩增效应 | 第20页 |
| ·Eri1对siRNA的降解作用 | 第20-21页 |
| ·ADAR对dsRNA或siRNA的修饰作用 | 第21页 |
| ·TSN基因的功能研究进展 | 第21-22页 |
| ·TSN是一种多功能蛋白 | 第21页 |
| ·TSN在RNAi途径中的作用 | 第21-22页 |
| ·家蚕RNAI途径中相关蛋白的研究进展 | 第22-24页 |
| 第二章 引言 | 第24-28页 |
| ·研究背景及意义 | 第24-25页 |
| ·主要研究内容 | 第25页 |
| ·研究技术路线 | 第25-28页 |
| 第三章 家蚕tsn基因的序列分析以及表达特征分析 | 第28-42页 |
| ·实验材料与试剂 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·实验试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法与步骤 | 第30-36页 |
| ·家蚕tsn基因全长ORF的获得 | 第30-31页 |
| ·家蚕tsn基因的信息分析 | 第31页 |
| ·家蚕tsn基因的组织表达谱以及亚细胞定位 | 第31-36页 |
| ·实验结果与分析 | 第36-40页 |
| ·家蚕tsn基因全长ORF序列以及推测的氨基酸序列 | 第36-37页 |
| ·tsn基因在不同的物种中高度保守 | 第37-38页 |
| ·家蚕tsn基因的组织表达谱 | 第38页 |
| ·家蚕tsn基因的亚细胞定位 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 家蚕TSN与AGO1和AGO2之间的相互作用 | 第42-48页 |
| ·实验材料与试剂 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·主要溶液的配制 | 第42页 |
| ·实验方法与步骤 | 第42-43页 |
| ·载体的构建 | 第42页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC)实验 | 第42-43页 |
| ·实验结果与分析 | 第43-45页 |
| ·目的载体的构建 | 第43-44页 |
| ·家蚕TSN与AGO1和AGO2之间的相互作用 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| 第五章 家蚕RNA编辑与RNA干涉途径的相互拮抗作用分析 | 第48-56页 |
| ·实验材料与试剂 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·主要溶液的配制 | 第48-49页 |
| ·实验方法与步骤 | 第49-50页 |
| ·dsRNA的制备 | 第49页 |
| ·细胞转染 | 第49-50页 |
| ·报告基因荧光素酶的检测 | 第50页 |
| ·western杂交 | 第50页 |
| ·实验结果与分析 | 第50-53页 |
| ·家蚕adar基因的组织表达谱 | 第50-51页 |
| ·家蚕RNA编辑和RNA干涉途径的拮抗作用检测 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| 第六章 抑制家蚕ADAR基因和TSN基因后对家蚕BMN4细胞引起的凋亡检测 | 第56-64页 |
| ·实验材料与试剂 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验试剂 | 第56页 |
| ·实验仪器 | 第56页 |
| ·主要溶液的配制 | 第56页 |
| ·实验方法与步骤 | 第56-57页 |
| ·dsRNA的制备 | 第56页 |
| ·家蚕细胞凋亡检测载体的构建 | 第56-57页 |
| ·细胞转染 | 第57页 |
| ·转基因细胞系的构建 | 第57页 |
| ·报告基因荧光素酶的检测 | 第57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-61页 |
| ·表达环状荧光素酶转基因细胞系细胞凋亡检测 | 第58-60页 |
| ·干涉家蚕RNA编辑途径相关蛋白后细胞凋亡检测 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第七章 抑制与过量表达家蚕TSN基因对家蚕BMN4细胞中干涉效率的影响 | 第64-70页 |
| ·实验材料与试剂 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| ·主要溶液的配制 | 第64页 |
| ·实验方法与步骤 | 第64-65页 |
| ·dsRNA的制备 | 第64页 |
| ·载体构建 | 第64页 |
| ·细胞转染 | 第64页 |
| ·转基因细胞的构建 | 第64-65页 |
| ·报告基因荧光素酶的检测 | 第65页 |
| ·western杂交 | 第65页 |
| ·实验结果与分析 | 第65-68页 |
| ·不同剂量dsRNA对tsn基因干涉抑制后对RNAi效率的影响 | 第65-66页 |
| ·转基因过量表达tsn基因对RNAi效率的影响 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 第八章 小结 | 第70-72页 |
| ·TSN基因的表达模式暗示其编码一个结构上保守的多功能蛋白 | 第70页 |
| ·家蚕TSN蛋白和AGO1以及AGO2蛋白具有相互作用的关系 | 第70页 |
| ·家蚕BMN4细胞中A到I的RNA编辑和RNA干涉之间没有明显的拮抗作用 | 第70页 |
| ·抑制家蚕ADAR基因和TSN基因不会引起CASPASE3介导的细胞凋亡 | 第70-71页 |
| ·家蚕TSN蛋白在RNAI途径中起着一定的作用 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 在读期间发表论文及参研课题情况 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
