| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 (Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·自噬研究进展 | 第12-17页 |
| ·自噬的概念 | 第12-13页 |
| ·自噬相关信号通路 | 第13-14页 |
| ·自噬的特征及检测方法 | 第14-17页 |
| ·哺乳动物雷帕霉素靶蛋白研究进展 | 第17-18页 |
| ·哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的概念 | 第17页 |
| ·哺乳动物雷帕霉素靶蛋白相关信号通路 | 第17-18页 |
| ·支链氨基酸 | 第18-19页 |
| ·人胚肾细胞-293T | 第19-20页 |
| ·RNA干扰 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·试验材料 | 第22-26页 |
| ·细胞、菌种、载体与质粒 | 第22-23页 |
| ·主要药品及试剂 | 第23页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第23-24页 |
| ·缓冲液 | 第24-26页 |
| ·试验方法 | 第26-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第26页 |
| ·干扰质粒的构建 | 第26页 |
| ·质粒的转化 | 第26-27页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第27页 |
| ·质粒的大量制备(试剂盒) | 第27-28页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第28-29页 |
| ·质粒提取产物或酶切产物的电泳检测 | 第29页 |
| ·人胚肾细胞的培养 | 第29-30页 |
| ·质粒转染细胞 | 第30-31页 |
| ·BCA法测定蛋白质浓度 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE/western Blot | 第31-33页 |
| ·流式细胞术 | 第33页 |
| ·透射电镜技术 | 第33页 |
| ·共聚焦显微镜技术(爬片法) | 第33-34页 |
| ·统计学方法 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-52页 |
| ·质粒小量制备后鉴定 | 第35页 |
| ·质粒小量制备后电泳鉴定 | 第35页 |
| ·质粒小量制备后酶切鉴定 | 第35页 |
| ·质粒大量制备后鉴定 | 第35-38页 |
| ·质粒大量制备后浓度与纯度测定 | 第35页 |
| ·质粒大量制备后电泳及酶切鉴定 | 第35-38页 |
| ·干扰效率鉴定 | 第38-41页 |
| ·转染后荧光显微镜观察细胞荧光 | 第38-39页 |
| ·转染后流式细胞术检测荧光细胞率 | 第39-40页 |
| ·干扰后western blot检测被干扰蛋白的干扰效率 | 第40-41页 |
| ·亮氨酸饥饿 | 第41页 |
| ·透射电镜观察自噬泡的产生 | 第41页 |
| ·共聚焦显微镜观察LC3-GFP表达质粒的荧光分布 | 第41页 |
| ·亮氨酸饥饿后western blot检测自噬相关蛋白 | 第41页 |
| ·亮氨酸饥饿后重补充 | 第41-44页 |
| ·western blot检测自噬相关蛋白 | 第41-44页 |
| ·western blot检测mTOR下游蛋白 | 第44页 |
| ·干扰mTOR上游调节蛋白 | 第44-52页 |
| ·干扰Rheb | 第44-45页 |
| ·干扰Raptor | 第45页 |
| ·干扰Gβ1 | 第45-52页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第52-57页 |
| ·讨论 | 第52-56页 |
| ·亮氨酸饥饿对细胞自噬的影响 | 第52页 |
| ·亮氨酸对细胞自噬的缓解及其信号机制 | 第52-53页 |
| ·mTOR上游调节蛋白参与亮氨酸对细胞自噬的调节 | 第53-56页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 在读期间发表的论文 | 第65页 |
