| 摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 大豆疫病的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 大豆疫病病原真菌简介 | 第14页 |
| 1.1.2 大豆疫病病原真菌的生物学特征 | 第14页 |
| 1.1.3 大豆疫病的病症及分布 | 第14-15页 |
| 1.1.4 大豆疫病的防治 | 第15-16页 |
| 1.2 Borrelidin的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 Borrelidin及其作用机制 | 第16-19页 |
| 1.2.2 Borrelidin结构类似物的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.3 开发新型大豆疫病杀菌剂的重要性 | 第20-21页 |
| 1.3 氨酰tRNA合成酶的研究进展 | 第21页 |
| 1.4 同源建模与分子对接技术的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.4.1 蛋白质三维结构模型的构建 | 第21-23页 |
| 1.4.2 分子对接和小分子筛选技术的应用 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的意义及内容 | 第24-25页 |
| 1.5.1 课题来源 | 第24页 |
| 1.5.2 目的意义及内容 | 第24-25页 |
| 技术路线图 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 数据来源 | 第26页 |
| 2.1.2 硬件平台 | 第26页 |
| 2.1.3 软件平台 | 第26-27页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第27-30页 |
| 2.2.1 培养基及各种试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.2 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.2.3 引物 | 第28-29页 |
| 2.2.4 主要仪器及厂家 | 第29-30页 |
| 2.3 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶模型的构建及结构优化 | 第30页 |
| 2.3.1 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶三维结构的构建 | 第30页 |
| 2.3.2 模型的结构合理性评价与分析 | 第30页 |
| 2.4 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶与Borrelidin相互作用的对接模拟研究 | 第30-31页 |
| 2.4.1 Borrelidin与大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶的分子对接 | 第30-31页 |
| 2.4.2 分子动力学模拟体系的建立 | 第31页 |
| 2.4.3 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶的虚拟点突变及分子对接 | 第31页 |
| 2.5 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶的异源表达与纯化 | 第31-33页 |
| 2.6 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶突变体的基因克隆与重组蛋白体外表达及纯化 | 第33-39页 |
| 2.6.1 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶突变体基因的扩增 | 第33-35页 |
| 2.6.2 PCR产物的验证及纯化 | 第35页 |
| 2.6.3 原核重组表达载体的构建及鉴定 | 第35-39页 |
| 2.6.4 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶突变体的诱导表达及纯化 | 第39页 |
| 2.7 苏氨酰tRNA合成酶的酶活性测定 | 第39-42页 |
| 2.7.1 酶活性测定方法的确定 | 第39-40页 |
| 2.7.2 基本酶动力学参数的测定 | 第40-42页 |
| 2.8 Borrelidin对大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶酶活性的抑制作用 | 第42页 |
| 2.9 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶抑制剂的虚拟筛选 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-72页 |
| 3.1 Borrelidin与大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶结合位点的研究 | 第43-51页 |
| 3.1.1 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶的同源建模 | 第43-46页 |
| 3.1.2 Borrelidin与大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶结合位点的确定 | 第46-48页 |
| 3.1.3 分子动力学模拟结果 | 第48-51页 |
| 3.1.4 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶的虚拟点突变及分子对接 | 第51页 |
| 3.2 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶的表达与纯化条件的优化结果 | 第51-54页 |
| 3.3 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶突变体的基因克隆 | 第54-56页 |
| 3.4 原核重组表达载体的构建与鉴定 | 第56-58页 |
| 3.4.1 PsThrRS-R466A突变体载体的构建与鉴定 | 第56-57页 |
| 3.4.2 其它突变体载体的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| 3.5 突变蛋白的诱导表达与纯化 | 第58-59页 |
| 3.6 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶的酶活性分析 | 第59-65页 |
| 3.6.1 大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶基本酶动力学参数的测定 | 第59-65页 |
| 3.6.2 野生型大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶与突变体酶活性的比较 | 第65页 |
| 3.7 Borrelidin对野生型大豆疫霉苏氨酰tRNA合成酶与突变体抑制活性的测定 | 第65-66页 |
| 3.8 Borrelidin结构类似物的药物筛选结果 | 第66-72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| 4.1 氨酰tRNA合成酶与Borrelidin相互作用机理研究 | 第72-73页 |
| 4.2 大豆疫霉与其它生物苏氨酰tRNA合成酶的多序列比对 | 第73-75页 |
| 4.3 大豆疫霉截短苏氨酰tRNA合成酶抑制剂的虚拟筛选 | 第75-76页 |
| 5 结论 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第88页 |
